[發(fā)明專利]一種調(diào)控CAR-T特異性活化的啟動子及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911236670.2
• 申請日: 2019-12-05
• 公開（公告）號: CN112921034A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張巍;陳軍;黃霞;齊亞男;趙永春;徐艷敏;趙文旭
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶精準(zhǔn)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;C07K19/00;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京元本知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11308
• 代理人: 黎昌莉

1.一種啟動子，其特征在于，所述啟動子由重復(fù)數(shù)為4的Hif1a調(diào)節(jié)元件和迷你啟動子連接構(gòu)成，所述Hif1α調(diào)節(jié)元件核酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的啟動子，其特征在于，所述啟動子受缺氧環(huán)境調(diào)控，所述迷你啟動子選自細(xì)胞病毒啟動子、HSV胸苷激酶的啟動子、猿猴病毒40的啟動子、腺病毒晚期啟動子和合成啟動子中的任一項。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的啟動子，其特征在于，將所述Hif1α調(diào)節(jié)元件的結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化得到優(yōu)化的Hif1α調(diào)節(jié)元件，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的啟動子，其特征在于，所述啟動子的核酸序列如SEQID NO：3所示。

5.一種包含缺氧啟動子的CAR結(jié)構(gòu)，其特征在于，所述CAR結(jié)構(gòu)包含受缺氧環(huán)境調(diào)控啟動的啟動子，所述啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3序列所示。

6.權(quán)利要求5所述的CAR結(jié)構(gòu)，其特征在于，所述CAR結(jié)構(gòu)的抗原識別區(qū)為ScFv，所述ScFv的氨基酸序列如SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9所示或其功能性變體。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的CAR結(jié)構(gòu)，其特征在于，所述CAR結(jié)構(gòu)的鉸鏈區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12所示或其功能性變體。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的CAR結(jié)構(gòu)，其特征在于，所述CAR結(jié)構(gòu)的跨膜區(qū)氨基酸序列如SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14所示或其功能性變體。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的CAR結(jié)構(gòu)，其特征在于，所述CAR結(jié)構(gòu)的胞內(nèi)共刺激結(jié)構(gòu)域氨基酸序列如SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16所示或其功能性變體。

10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的CAR結(jié)構(gòu)，其特征在于，所述CAR結(jié)構(gòu)的胞內(nèi)活化信號的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示或其功能性變體。

11.根據(jù)權(quán)利要求5-10任一項所述的CAR結(jié)構(gòu)，其特征在于，所述CAR結(jié)構(gòu)的氨基酸序列如SEQ ID NO:18-21任一所示或其功能性變體。

12.一種分離的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼權(quán)利要求5-10任一項所述的CAR結(jié)構(gòu)。

13.包含缺氧啟動子的CAR表達(dá)載體，其特征在于，所述缺氧啟動子的核苷酸序列如SEQID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示；所述表達(dá)載體為慢病毒表達(dá)載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體、腺病毒表達(dá)載體、腺相關(guān)病毒表達(dá)載體、DNA載體，RNA載體、質(zhì)粒中的任一種。

14.權(quán)利要求13所述的CAR表達(dá)載體，其特征在于，所述載體包含如SEQ ID NO:4-7任一所示的核苷酸序列。

15.一種包含權(quán)利要求15或16所述表達(dá)載體的CAR-T細(xì)胞。

16.一種提高缺氧環(huán)境下CAR-T細(xì)胞殺傷能力的方法，其特征在于，構(gòu)建一種權(quán)利要求13所述的CAR結(jié)構(gòu)的表達(dá)載體并感染T淋巴細(xì)胞，然后作用于靶細(xì)胞。

17.權(quán)利要求1所述的啟動子或權(quán)利要求5所述的CAR結(jié)構(gòu)或權(quán)利要求12所述的核酸分子或權(quán)利要求13所述的表達(dá)載體或權(quán)利要求15所述的CAR-T細(xì)胞在制備腫瘤藥物中的應(yīng)用。

18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤為惡性腫瘤，包括急性淋巴樣白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、前列腺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、胰腺癌、肺癌、腎癌、肝癌、腦癌和皮膚癌；所述腫瘤高表達(dá)CD19、CD20、CD123、CD22、BCMA、ROR1、CEA、間皮素、PSCA、PSMA、c-Met、GPC-3、Her2、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1TCR、MAGE A3TCR中的一種或多種。