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[發明專利]一種調控CAR-T特異性活化的啟動子及其應用在審

專利信息
申請號: 201911236670.2 申請日: 2019-12-05
公開(公告)號: CN112921034A 公開(公告)日: 2021-06-08
發明(設計)人: 張巍;陳軍;黃霞;齊亞男;趙永春;徐艷敏;趙文旭 申請(專利權)人: 重慶精準生物技術有限公司
主分類號: C12N15/113 分類號: C12N15/113;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;C07K19/00;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02
代理公司: 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308 代理人: 黎昌莉
地址: 400000 重*** 國省代碼: 重慶;50
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摘要:
搜索關鍵詞: 一種 調控 car 特異性 活化 啟動子 及其 應用
【權利要求書】:

1.一種啟動子,其特征在于,所述啟動子由重復數為4的Hif1a調節元件和迷你啟動子連接構成,所述Hif1α調節元件核酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根據權利要求1所述的啟動子,其特征在于,所述啟動子受缺氧環境調控,所述迷你啟動子選自細胞病毒啟動子、HSV胸苷激酶的啟動子、猿猴病毒40的啟動子、腺病毒晚期啟動子和合成啟動子中的任一項。

3.根據權利要求1所述的啟動子,其特征在于,將所述Hif1α調節元件的結構進行優化得到優化的Hif1α調節元件,其核苷酸序列如SEQ ID NO:2。

4.根據權利要求1-3任一項所述的啟動子,其特征在于,所述啟動子的核酸序列如SEQID NO:3所示。

5.一種包含缺氧啟動子的CAR結構,其特征在于,所述CAR結構包含受缺氧環境調控啟動的啟動子,所述啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3序列所示。

6.權利要求5所述的CAR結構,其特征在于,所述CAR結構的抗原識別區為ScFv,所述ScFv的氨基酸序列如SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9所示或其功能性變體。

7.根據權利要求5所述的CAR結構,其特征在于,所述CAR結構的鉸鏈區的氨基酸序列如SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12所示或其功能性變體。

8.根據權利要求5所述的CAR結構,其特征在于,所述CAR結構的跨膜區氨基酸序列如SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14所示或其功能性變體。

9.根據權利要求5所述的CAR結構,其特征在于,所述CAR結構的胞內共刺激結構域氨基酸序列如SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16所示或其功能性變體。

10.根據權利要求5所述的CAR結構,其特征在于,所述CAR結構的胞內活化信號的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示或其功能性變體。

11.根據權利要求5-10任一項所述的CAR結構,其特征在于,所述CAR結構的氨基酸序列如SEQ ID NO:18-21任一所示或其功能性變體。

12.一種分離的核酸分子,其特征在于,所述核酸分子編碼權利要求5-10任一項所述的CAR結構。

13.包含缺氧啟動子的CAR表達載體,其特征在于,所述缺氧啟動子的核苷酸序列如SEQID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示;所述表達載體為慢病毒表達載體、逆轉錄病毒表達載體、腺病毒表達載體、腺相關病毒表達載體、DNA載體,RNA載體、質粒中的任一種。

14.權利要求13所述的CAR表達載體,其特征在于,所述載體包含如SEQ ID NO:4-7任一所示的核苷酸序列。

15.一種包含權利要求15或16所述表達載體的CAR-T細胞。

16.一種提高缺氧環境下CAR-T細胞殺傷能力的方法,其特征在于,構建一種權利要求13所述的CAR結構的表達載體并感染T淋巴細胞,然后作用于靶細胞。

17.權利要求1所述的啟動子或權利要求5所述的CAR結構或權利要求12所述的核酸分子或權利要求13所述的表達載體或權利要求15所述的CAR-T細胞在制備腫瘤藥物中的應用。

18.根據權利要求17所述的應用,其特征在于,所述腫瘤為惡性腫瘤,包括急性淋巴樣白血病、慢性淋巴細胞白血病、慢性髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、前列腺癌、結直腸癌、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、胰腺癌、肺癌、腎癌、肝癌、腦癌和皮膚癌;所述腫瘤高表達CD19、CD20、CD123、CD22、BCMA、ROR1、CEA、間皮素、PSCA、PSMA、c-Met、GPC-3、Her2、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1TCR、MAGE A3TCR中的一種或多種。

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