[發(fā)明專利]一種可檢測(cè)SNP的新型CPA方法、引物組和試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911236426.6
• 申請(qǐng)日: 2019-12-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110878367A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張建民;溫俊平;廖明;張紅霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/6858;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/42
• 代理公司: 佛山市禾才知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44379
• 代理人: 資凱亮;劉穎

1.一種可檢測(cè)SNP的新型CPA方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取DNA為待檢測(cè)模板；

(2)設(shè)計(jì)交叉引物組，所述交叉引物上設(shè)計(jì)與該DNA突變位點(diǎn)相結(jié)合的RNA堿基；

(3)建立反應(yīng)體系，所述反應(yīng)體系中包含RnaseHⅡ酶，將待檢測(cè)模板加入到反應(yīng)體系中進(jìn)行擴(kuò)增，當(dāng)交叉引物與DNA突變位點(diǎn)相結(jié)合時(shí)，激活RnaseHⅡ酶發(fā)生切割，使擴(kuò)增反應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行，當(dāng)交叉引物與DNA突變位點(diǎn)不能結(jié)合時(shí)，擴(kuò)增反應(yīng)無(wú)法進(jìn)行；

(4)判斷反應(yīng)物中是否具有目標(biāo)DNA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可檢測(cè)SNP的新型CPA方法，其特征在于，所述步驟(4)中，以顯色法檢測(cè)反應(yīng)物中是否具有目標(biāo)DNA。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可檢測(cè)SNP的新型CPA方法，其特征在于，所述交叉引物組包括引物：LoopB、B3、F3、B2和BIP。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可檢測(cè)SNP的新型CPA方法，其特征在于，所述反應(yīng)體系包括緩沖液、硫酸鎂、dNTP、Bst酶、RnaseHⅡ酶、LoopB、B3、F3、B2和BIP。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可檢測(cè)SNP的新型CPA方法，其特征在于，所述反應(yīng)體系的反應(yīng)溫度為61℃。

6.基于權(quán)利要求1所述的可檢測(cè)SNP的新型CPA方法的用于檢測(cè)雞白痢沙門(mén)菌的引物組，其特征在于，包括：

LoopB：5′-GCAATATTCTTATGCCTATCAGAGT-3′；

B3：5′-GGCAGTGATGTTCCACAAT-3′；

F3：5′-ACTATTGCTTGCTATGGAAGAC-3′；

B2：5′-TAACGAACCTGCAACAGCTTTAAT-3′；

BIP：

5′-TGCAACAGCTTTAATACTGCATCAAGTGATGAGATAGAC(RNA堿基)TCTAC-C3 spacer-3′；

所述引物組針對(duì)雞白痢沙門(mén)菌rfbs基因。

7.基于權(quán)利要求1所述的可檢測(cè)SNP的新型CPA方法的檢測(cè)雞白痢沙門(mén)菌的試劑盒，其特征在于，包括反應(yīng)液，所述反應(yīng)液包括LoopB、B3、F3、B2和BIP；

LoopB：5′-GCAATATTCTTATGCCTATCAGAGT-3′；

B3：5′-GGCAGTGATGTTCCACAAT-3′；

F3：5′-ACTATTGCTTGCTATGGAAGAC-3′；

B2：5′-TAACGAACCTGCAACAGCTTTAAT-3′；

BIP：

5′-TGCAACAGCTTTAAT-ACTGCATCAAGTGATGAGATAGAC(RNA堿基)TCTAC-C3 spacer-3′；

所述引物組針對(duì)雞白痢沙門(mén)菌rfbs基因。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述反應(yīng)液包括緩沖液2.5μl、硫酸鎂2.0μl、dNTP 2μl、Bst酶1.0μl、RnaseHⅡ酶0.1μl、LoopB+B2 1μl、B3+F3 0.5μl和BIP 3μl。