[發明專利]一種當歸提取物刺激的干細胞外泌體的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201911231718.0
• 申請日: 2019-12-05
• 公開（公告）號: CN111172103A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 吳金蕓;徐文倩;葉華衍;張炬;雷登
• 申請（專利權）人: 伯仕利生物科技發展（鹽城）有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/28;A61P9/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種當歸提取物刺激的干細胞外泌體的制備方法及其應用，通過在培養間充質干細胞(MSC)時添加當歸提取物，能促進MSC外泌體的釋放，獲得的外泌體具有更強的促血管內皮細胞增殖的能力，可用于機體損傷類血管新生的修復治療；該發明方法簡便易行，適用于不同來源的干細胞外泌體的大規模生產，為干細胞外泌體應用于醫學轉化事業提供一條新的路徑；本發明公開了一種當歸提取物刺激的干細胞外泌體的制備方法及其應用，工藝設計合理，可行性高，且可產業化和衍生化，適用于制備不同來源的間充質干細胞的“血管修復外泌體”，同時可將干細胞外泌體應用于其他機體損傷的血管修復治療，具有較優異的治療效果。

技術領域

本發明涉及生物干細胞技術領域，具體是一種當歸提取物刺激的干細胞外泌體的制備方法及其應用。

背景技術

間充質干細胞(mesenchymalstemcells，MSC)是一組源于基質的異質細胞群，可以從人體大多數組織獲取。

近年來國內外大量的基礎和臨床研究證實間充質干細胞可以遷移到傷口組織、分泌血管內皮生長因子等促進新生血管形成、刺激角質形成細胞參與表皮再形成，進而促進糖尿病足潰瘍的愈合、改善臨床癥狀，其原因是因為間充質干細胞能分泌多種細胞因子，如血管內皮細胞生長因子(VEGF)、角質細胞生長因子(KGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、血小板樣衍生生長因子(PDGF)、纖維連接蛋白(FN)等。

其中，成纖維細胞生長因子(FGF)是一類來源于中胚層和神經外胚層的細胞分泌的具有重要生物活性的細胞生長因子，也是一類重要的促有絲分裂因子和促細胞分化的誘導因子。有關研究表明，FGF能促進組織和神經修復、再生及傷口愈合和新生血管生成等多種生理作用；FGF是現如今體內發現的最有效的血管生成因子之一，其在毛細管基底膜降解、內皮細胞遷移增生、膠原合成等新生血管生成過程中具有明顯的促進作用。

角質細胞生長因子(KGF)屬于成纖維細胞生長因子(FGFs)家族的成員之一，又稱FGF-7，主要由間質細胞產生，KGF與上皮細胞上的受體KGFR特異性結合來參與調控信號傳遞級聯反應，參與組織器官發育和細胞生長增殖等多種生物過程，改善皮膚微循環及促進血管擴張，促進創傷愈合，并且在促進毛發再生也起到重要作用。但是，干細胞分泌的因子都屬于大分子蛋白類，其被皮膚和毛囊前體細胞吸收的比例率差。

針對上述情況，我們公開了一種當歸提取物刺激的干細胞外泌體的制備方法及其應用，這是我們亟待解決的問題之一。

發明內容

本發明的目的在于提供一種當歸提取物刺激的干細胞外泌體的制備方法及其應用，以解決現有技術中的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種當歸提取物刺激的干細胞外泌體的制備方法，包括以下步驟：

1)間充質干細胞的制備；

2)將步驟1)得到的間充質干細胞接種于培養板中，無血清培養；

3)在培養基中加入當歸提取物，繼續培養并收集細胞培養上清液；

4)超速離心，得到所述干細胞外泌體。

較優化地，包括以下步驟：

1)間充質干細胞的制備；步驟1)中進行間充質干細胞的制備，間充質干細胞能分泌多種細胞因子，如血管內皮細胞生長因子(VEGF)、角質細胞生長因子(KGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、血小板樣衍生生長因子(PDGF)、纖維連接蛋白(FN)等；

2)取步驟1)制備的間充質干細胞，用0.25％胰蛋白酶進行常規消化、收集細胞懸液；