[發明專利]阿司匹林代謝及血小板高反應性的化學發光檢測方法及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201911224764.8
• 申請日: 2019-12-04
• 公開（公告）號: CN111735809B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 李明勇
• 申請（專利權）人: 湖南遠璟生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種阿司匹林代謝及血小板高反應性的化學發光檢測方法及檢測試劑盒，所述試劑盒包括結合11?脫氫血栓烷B2的單克隆抗體、11?脫氫血栓烷B2競爭品、磁微粒和發光底物，其中單克隆抗體為鼠單抗，鼠單抗輕鏈可變區氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示，鼠單抗重鏈可變區氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示。本發明采用阿司匹林代謝及血小板高反應性的化學發光檢測方法及檢測試劑盒可以快速檢測患者是否具有阿司匹林耐藥性或抵抗，為臨床給藥提供了科學的參考依據，并且本發明中的試劑盒和檢測方法靈敏度高準確性好，不易被生化指標影響，本發明降低了臨床患者由于出現阿司匹林抵抗會導致抗血小板聚集治療失敗或效果不佳的問題。

技術領域

本發明涉及一種阿司匹林代謝及血小板高反應性的化學發光檢測方法及檢測試劑盒，屬于生物檢測領域。

背景技術

一、TXA2的代謝及11dhTXB2的檢測

11-脫氫血栓素B2(11-dehydro-thromboxane B2，11dhTXB2)是血栓烷素A2(thromboxane A2，TXA2)的終末代謝產物，主要經腎排出，在止血及心血管疾病的發生過程中均起到重要作用。花生四烯酸在前列腺素H合成酶1和2(亦被稱為COX-1和COX-2)的作用下生成前列腺素H。前列腺素H化學性質不穩定，可在異構酶的作用下轉化為多種具有生物活性的前列腺素類物質，包括TXA2、前列環素I2、前列腺素D2、前列腺素E2及前列腺素F2α等。TXA2主要經COX-1途徑在血小板中合成，新生的血小板同時表達COX-1和COX-2，而成熟血小板僅表達COX-1，COX-2則主要表達于單核細胞、內皮細胞等有核細胞中。TXA2有強烈的縮血管作用，還可通過結合血栓烷素血小板受體(thromboxane platelet receptor，TPR)激活血小板，促進其聚集，從而發揮促血栓形成作用。除TXA2外，凝血酶、膠原和腺苷二磷酸(adenosinediphosphate，ADP) 亦能通過其他通路激活血小板。TXA2高度不穩定，會迅速被水解為較穩定的血栓烷素B2(thromboxane B2，TXB2)。TXB2隨后在肝中被轉化為半衰期更長的11dhTXB2，并經尿液排出。TXA2則是花生四烯酸在環氧合酶(cyclooxygenase，COX)作用下產生的具有促血小板聚集、收縮血管等生物活性作用的物質，在血栓形成過程中有重要作用。阿司匹林能通過不可逆地抑制COX-1活性，減少TXA2合成，從而抑制血小板聚集及其在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)發展和急性冠狀動脈綜合征(acutecoronarysyndrome， ACS)發生中的作用。TXA2的代謝產物11dhTXB2水平能反映血小板活性及阿司匹林的抗血小板效果。

體外血小板激活會明顯影響血清TXB2的測定結果，卻對血清11dhTXB2水平無影響，同時尿液與血清中11dhTXB2的濃度有良好的相關性，因而測定尿液11dhTXB2的含量能更有效地反映體內TXA2的產生。11dhTXB2的檢測方法包括放射免疫法(radioimmunoassay，RIA)、酶聯免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)及液相色譜-串聯質譜法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS)。由于11dhTXB2的分子量較小，且在尿液中的濃度不高，目前多采用ELISA法進行測定，所使用的抗11dhTXB2抗體有單克隆抗體和多克隆抗體兩種，測得的尿11dhTXB2濃度需用尿肌酸酐濃度進行校正，以排除尿液濃度和腎功能的影響，因此可用隨機尿樣本進行檢測。LC-MS/MS法應用時間較ELISA與RIA短，但能較為特異地檢測11dhTXB2，檢測結果變異率也更小。

二、阿司匹林的作用及機制