[發(fā)明專利]阿司匹林代謝及血小板高反應(yīng)性的化學(xué)發(fā)光檢測方法及檢測試劑盒

有效

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• 申請日: 2019-12-04
• 公開（公告）號: CN111735809B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李明勇
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南遠(yuǎn)璟生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種阿司匹林代謝及血小板高反應(yīng)性的化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒用于檢測受試者尿樣中的11-脫氫血栓烷B2含量，所述試劑盒包括結(jié)合11-脫氫血栓烷B2的單克隆抗體、11-脫氫血栓烷B2競爭品、磁微粒和發(fā)光底物，其中單克隆抗體為鼠單抗，鼠單抗輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示，鼠單抗重鏈可變區(qū)氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于，所述鼠單抗輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示的氨基酸由基因序列如序列表SEQ ID NO：1所示的基因序列表達(dá)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于，所述鼠單抗重鏈可變區(qū)氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示的氨基酸由基因序列如序列表SEQ ID NO：3所示的基因序列表達(dá)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于：所述11-脫氫血栓烷B2競爭品為堿性磷酸酶標(biāo)記的11-DH-TXB2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于：所述鼠單抗為生物素標(biāo)記的鼠單抗。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括質(zhì)控品或校準(zhǔn)品11-DH-TXB2。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于，所述發(fā)光底物為酶促發(fā)光底物。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于，所述磁微粒為鏈霉親和素包被的磁微粒。

9.一種阿司匹林代謝檢測及血小板高反應(yīng)性檢測方法，其特征在于，所述檢測方法通過檢測待測樣本中的11-DH-TXB2濃度獲得阿司匹林的代謝能力，所述檢測方法具體為：

i.分別制備11-DH-TXB2校準(zhǔn)品、生物素結(jié)合的鼠單克隆抗體、堿性磷酸酶結(jié)合的11-DH-TXB2競爭品；

ii.向步驟i）制備的生物素結(jié)合的鼠單克隆抗體中同時(shí)加入堿性磷酸酶結(jié)合的11-DH-TXB2競爭品和待測11-DH-TXB2樣品，競爭反應(yīng)，其中鼠單抗輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示，鼠單抗重鏈可變區(qū)氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示；

iii.向完成步驟ii）的體系中加入包被鏈霉親和素的磁微粒，外加磁場吸附沉淀；

iv.取步驟iii）中的沉淀，清洗后加入酶促發(fā)光底物；

v.檢測發(fā)光強(qiáng)度，發(fā)光強(qiáng)度與待測樣本中的11-DH-TXB2成反比。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的阿司匹林代謝檢測及血小板高反應(yīng)性檢測方法，其特征在于，所述樣本中11-DH-TXB2濃度采用四參數(shù)Logistic方程擬合計(jì)算。

11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的阿司匹林代謝檢測及血小板高反應(yīng)性檢測方法，其特征在于，所述待測樣本為待測者尿液樣本。

12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的阿司匹林代謝檢測及血小板高反應(yīng)性檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括給予待測者不同劑量的阿司匹林藥物。

13.一種經(jīng)基因編輯的鼠單克隆抗體，用于結(jié)合11-DH-TXB2，其特征在于，所述鼠單克隆抗體輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示，鼠單抗重鏈可變區(qū)氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的鼠單克隆抗體，其特征在于，所述鼠單抗重鏈可變區(qū)氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示的氨基酸由基因序列如序列表SEQ ID NO：3所示的基因序列表達(dá)。