[發(fā)明專利]一種土貝母藥材UPLC特征圖譜的構(gòu)建方法及其成分含量測定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911222672.6
• 申請日: 2019-12-03
• 公開（公告）號: CN111007190B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃敏燁;李振雨;童培珍;曹斯瓊;潘禮業(yè);孫冬梅;陳向東;魏梅;程學(xué)仁
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東一方制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 廣州一銳專利代理有限公司 44369
• 代理人: 楊昕昕;董云

本發(fā)明涉及一種土貝母藥材UPLC特征圖譜的構(gòu)建方法及其成分含量測定方法，所述的土貝母藥材的成分含量測定方法，包括如下步驟：（1）分別吸取對照品溶液和待測土貝母藥材樣品溶液注入超高效液相色譜儀，測定相應(yīng)峰面積；（2）通過外標(biāo)法計算土貝母苷甲的含量；（3）再通過一測多評法計算土貝母苷乙、土貝母苷丙的含量。本發(fā)明通過構(gòu)建土貝母藥材的UPLC特征圖譜，測定峰面積，采用外標(biāo)法計算出土貝母苷甲的含量，再通過一測多評計算出土貝母苷乙、土貝母苷丙的含量，從根本上快速、準(zhǔn)確地對土貝母進行定量定性分析，具有一定的特征性，本發(fā)明所述的方法快速、穩(wěn)定且專屬性強，基線平穩(wěn)，為土貝母藥材質(zhì)量控制提供科學(xué)的新方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥鑒別領(lǐng)域，具體涉及一種土貝母藥材UPLC特征圖譜的構(gòu)建方法及其成分含量測定方法。

背景技術(shù)

土貝母俗稱野瓜蔞，也稱假貝母、草貝母、地苦膽等，原載于清代趙氏所編的《本草綱目拾遺》，2015年版《中國藥典》規(guī)定土貝母為葫蘆科植物土貝母的干燥塊莖，廣泛分布于河北、山西、山東、河南、湖北、湖南等地。文獻報道，目前從土貝母中分離得到多種皂苷類、甾醇及其苷類、酯類、生物堿、黃酮類等成分，其中皂苷類為土貝母的主要活性成分。現(xiàn)代藥理研究表明，土貝母具有抗炎、消腫、抗病毒、抗白血病、免疫抑制和殺精作用等。

2015年版《中國藥典》僅以土貝母苷甲作為含量測定指標(biāo)，由于中藥有效成分多樣性及復(fù)雜性，單一成分的含量測定難以全面反映藥材的內(nèi)在質(zhì)量，且亦缺乏專屬性。中藥指紋/特征圖譜能夠提供更為全面、豐富的信息，因此常用于中藥材的質(zhì)量控制研究；一測多評法是借助相對校正因子，只需測定1個成分（內(nèi)參物）即可實現(xiàn)對多個成分的含量測定，鑒于大多中藥對照品制備困難，價格昂貴，或易于分解等因素難以獲得，一測多評法能有效解決以上難題，在中藥成分分析中逐漸得以廣泛應(yīng)用。目前文獻關(guān)于土貝母的指紋/特征圖譜和含量測定研究均采用高效液相色譜法（HPLC法），該方法用時時間長，靈敏度低、分離能力有限，已經(jīng)不能很好的解決復(fù)雜中藥分析過程中的實際問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供了一種土貝母藥材UPLC特征圖譜構(gòu)建方法及其成分含量測定方法，采用外標(biāo)法計算出了土貝母苷甲的含量，再通過一測多評法計算土貝母苷乙、土貝母苷丙的含量，該方法快速、穩(wěn)定且專屬性強，能夠更全面的反映土貝母藥材的特征和質(zhì)量，為土貝母藥材質(zhì)量控制提供科學(xué)的新方法。

本發(fā)明所要解決的上述技術(shù)問題，通過如下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：

一種土貝母藥材UPLC特征圖譜的構(gòu)建方法，包含如下步驟：

（1）精密稱取土貝母藥材粉末，制備得到土貝母藥材供試品溶液；

（2）將土貝母藥材供試品溶液采用超高效液相色譜儀分析，得到土貝母藥材UPLC特征圖譜。

作為一種優(yōu)選方案，所述超高效液相色譜儀分析的色譜條件為：采用規(guī)格為2.1×100mm，1.6μm的Waters Cortecs T3色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.05~0.15%的磷酸水溶液為流動相B，進行梯度洗脫，柱溫為20~40℃；流速為0.2~0.4ml/min；檢測波長為180~220nm，進樣量為0.5~1.5μl。

作為一種優(yōu)選方案，所述梯度洗脫條件為：0~4min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)變化為5%~11%，流動相B的體積分?jǐn)?shù)為95%~89%；4~7min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)變化為11%~20%，流動相B的體積分?jǐn)?shù)變化為89%~80%；7~21min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)變化為20%~28%，流動相B的體積分?jǐn)?shù)變化為80%~72%；21~30min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)變化為28%~32%，流動相B的體積分?jǐn)?shù)變化為72%~68%；30~33min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)變化為32%~35%，流動相B的體積分?jǐn)?shù)變化為68%~65%；33~38min，流動相A的體積分?jǐn)?shù)為35%，流動相B的體積分?jǐn)?shù)為65%。