[發明專利]成色劑穩定劑的用途及GA檢測試劑、試劑盒和方法

在審

• 申請號: 201911214510.8
• 申請日: 2019-12-02
• 公開（公告）號: CN112980920A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 鄭夏雯;杜少卿
• 申請（專利權）人: 深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/28
• 分類號: C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 崔曉嵐;張穎玲

本申請公開了成色劑穩定劑的用途及GA檢測試劑、試劑盒和方法。具體地所述用途為選自以下組中的物質作為溶液中4?氨基安替比林的穩定劑的用途，其中所述組由蛋白質類物質、非還原性氨基酸、表面活性劑組成，其中所述表面活性劑選自兩性離子表面活性劑和非離子表面活性劑。本發明的穩定劑能夠使含有4?氨基安替比林的試劑，特別是用于檢測樣本中的糖化白蛋白含量的試劑快速達到穩定狀態，從而能夠獲得更為準確的結果。

技術領域

本申請涉及糖化白蛋白的檢測，特別涉及糖化白蛋白的酶法檢測中成色劑的穩定，含成色劑穩定劑的檢測試劑及檢測方法。

背景技術

糖尿病診斷及控制中，常需要檢測血液中與糖代謝異常相關的物質，如血糖(GLU)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、糖化血清蛋白(GSP)和糖化白蛋白(GA)等。其中，為了獲得能夠反映短期的血糖水平的指標，通常需要測定GA。因為白蛋白半衰期較短(2-3周)，利用血清糖化白蛋白與血清總白蛋白的百分比來精確反映短期的血糖水平[1]，尤其適用于血糖波動較大的新診斷患者降糖治療時的療效觀察。

GA的檢測手段有高壓液相離子交換法(HPLC法)、固體酶法和液態酶法。HPLC法可準確檢測，但代價高昂，處理樣本量小，不適宜臨床常規開展。固定酶法簡化測定過程，提高檢測效率，但臨床應用中發現存在糖化氨基酸注射藥物干擾[2]。液態酶法簡單、快速、靈敏、準確定量。液態酶法中首先加入蛋白酶將糖化白蛋白分解成糖化氨基酸，再加入糖化氨基酸氧化酶(酮胺氧化酶(Ketoamine oxidase，KAOD))作用，生成過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶(POD)和顯色劑的作用下顯色，通過測定色素的吸光度而定量測定糖化白蛋白的濃度。

測定血清糖化白蛋白濃度的同時，測定血清總白蛋白(可利用如BCG/BCP法)。然后將所測得的糖化白蛋白濃度除以總白蛋白濃度，計算出樣本的糖化白蛋白值(％)。

在液態酶法中，過氧化氫在POD和顯色劑的作用下顯色這一過程，常存在顯色的色素原不穩定的問題。其中，如果使用的是無色型單色素，類似N-(羧甲基氨基羰基)-4,4-雙(二甲胺)聯苯胺(DA64)，則存在無法長期穩定的情況[3]。有人提出可以通過加入四唑鎓和疊氮化鈉提高反應靈敏度并減少錯誤顯色。另有人提出可以添加β-環糊精及組合物等維持長期穩定。

如果使用色素為trinder型(特林德型)，即成色劑4-氨基安替比林(4-AAP)和含有發色團的發色劑的顯色劑組合，則存在成色劑易與體系發生作用，數天內試劑達不到穩定狀態，導致與發色劑作用后產生空白反應度持續升高的問題。對此，目前尚未有報道能夠有效使trinder型色素快速穩定的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能夠快速穩定trinder型色素且不干擾檢測的物質，從而提供檢測準確性和一致性得到改善的糖化白蛋白檢測試劑和試劑盒及糖化白蛋白的檢測方法。

為此，本發明的第一方面提供選自以下組中的物質作為溶液中4-氨基安替比林的穩定劑的用途，其中所述組由蛋白質類物質、非還原性氨基酸、表面活性劑組成，其中所述表面活性劑選自兩性離子表面活性劑和非離子表面活性劑。

根據一種具體的實施方式，所述4-氨基安替比林可在糖化白蛋白的檢測中作為成色劑，其中所述4-氨基安替比林可以0.5～20mM的濃度存在于所述溶液中。所述4-氨基安替比林的濃度優選為0.5～10mM。

在一種實施方式中，所述蛋白質類物質可為選自酶和非酶蛋白中的一種或多種。優選地，所述酶為抗壞血酸氧化酶和膽紅素氧化酶。優選地，所述非酶蛋白為牛血清白蛋白、蠶絲蛋白、酪蛋白和乳清蛋白。

根據本發明的優選的實施方式，所述蛋白質類物質為牛血清白蛋白和/或蠶絲蛋白。

在該實施方式中，所述酶在所述溶液中的含量可為3～20UI/mL，優選為15～20UI/mL；所述非酶蛋白在所述溶液中的含量可為0.05～1％，優選為0.2～0.5％。