[發(fā)明專利]一種PT141合成方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911214258.0
• 申請(qǐng)日: 2019-12-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110724188B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭春旭;孔亞;顧維煒;黃保勝;周黎;王良友
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州天馬醫(yī)藥集團(tuán)天吉生物制藥有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/685
• 分類號(hào): C07K14/685;C07K1/04;C07K1/06;C07K1/16
• 代理公司: 蘇州睿昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32277
• 代理人: 馬小慧

本發(fā)明公開(kāi)了一種PT141合成方法，屬于多肽合成技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的合成方法包括如下步驟(1)以Rink HMBA?AM Resin和Fmoc?Lys(Boc)?OH為原料，制備Fmoc?Lys(Boc)?HMBA?Am Resin；(2)在步驟(1)制得的Fmoc?Lys(Boc)?HMBA?Am Resin上通過(guò)Fmoc固相合成法依次偶聯(lián)保護(hù)基氨基酸，得到線性PT141全保護(hù)肽樹(shù)脂；(3)將步驟(2)制得的線性PT141全保護(hù)肽樹(shù)脂用裂解液裂解脫除氨基酸保護(hù)基，對(duì)所得產(chǎn)物進(jìn)行環(huán)化處理，使得肽鏈在2位的Asp處與7位Lys處成環(huán)；(4)對(duì)步驟(3)所得環(huán)化產(chǎn)物進(jìn)行甲酯化脫除HMBA?Am Resin殘基，而后將產(chǎn)物水解，經(jīng)過(guò)純化，冷凍干燥得PT141。本發(fā)明的方法相對(duì)其他固相方法收率更高，相對(duì)酶制劑方法成本較低，且易于操作，工藝較為簡(jiǎn)單。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種PT141合成方法，屬于多肽合成技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

PT141，即布雷默浪丹(Bremelanotide)，是一種alpha-黑素細(xì)胞刺激激素類似物。由美國(guó)Palatin公司開(kāi)發(fā)作為一種治療性功能障礙的環(huán)肽類藥物。PT141為人工合成的氮端乙酰化環(huán)七肽化合物，肽序?yàn)?/p>

Ac-Nle-[Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys]-OH

其化學(xué)結(jié)構(gòu)存在兩處羧基，天冬氨酸側(cè)鏈羧基和賴氨酸側(cè)鏈氨基通過(guò)形成酰胺鍵成環(huán)，由于C端羧基的存在，直接液相環(huán)化產(chǎn)物不唯一，對(duì)合成工藝來(lái)說(shuō)存在挑戰(zhàn)。目前，合成PT141方法主要為固相合成法，以Fmoc-Asp(OAllyl)-OH和Fmoc-Lys(Alloc)-OH為原料進(jìn)行合成，但是在合成過(guò)程中存在保護(hù)氨基酸和脫保護(hù)試劑昂貴以及采用HF裂解方式對(duì)設(shè)備要求較高，并且對(duì)環(huán)境污染也較嚴(yán)重的問(wèn)題，同時(shí)產(chǎn)品收率也比較低。中國(guó)專利200710048824.6公開(kāi)了一種采用Fmoc(芴甲氧羰基)保護(hù)的固相合成方法，收率為17％。中國(guó)專利200610086841.4公開(kāi)的PT-141的固相合成方法，收率為40％以下。

中國(guó)專利201510667256.2公開(kāi)了一種分別合成Ac-Nle-Asp(COOH)-otBu和Boc-His(Trt)-D-Phe-Arg(pbf)-TrP(Boc)-Lys(IVDde)-HMBA-P的方法，該方法需要合成大量片斷Ac-Nle-Asp(COOH)-otBu，同時(shí)脫除Lys保護(hù)基時(shí)需要使用水合肼等危險(xiǎn)化合物。

中國(guó)專利201710619602.9使用酶制劑進(jìn)行環(huán)化，對(duì)于反應(yīng)環(huán)境條件控制要求比較嚴(yán)格，且酶制劑較昂貴。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種PT141合成方法，本發(fā)明的方法相對(duì)其他固相方法收率更高，相對(duì)酶制劑方法成本較低，且易于操作，工藝較為簡(jiǎn)單。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種PT141合成方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)以Rink HMBA-Am Resin和Fmoc-Lys(Boc)-OH為原料，制備Fmoc-Lys(Boc)-HMBA-Am Resin；

(2)在步驟(1)制得的Fmoc-Lys(Boc)-HMBA-Am Resin上通過(guò)Fmoc固相合成法依次偶聯(lián)保護(hù)基氨基酸，得到線性PT141全保護(hù)肽樹(shù)脂；

(3)將步驟(2)制得的線性PT141全保護(hù)肽樹(shù)脂用裂解液裂解脫除氨基酸保護(hù)基，對(duì)所得產(chǎn)物進(jìn)行環(huán)化處理，使得肽鏈在2位的Asp處與7位Lys處成環(huán)；

(4)對(duì)步驟(3)所得環(huán)化產(chǎn)物進(jìn)行甲酯化脫除HMBA-Am Resin殘基，而后將產(chǎn)物水解，經(jīng)過(guò)純化，冷凍干燥得PT141。

進(jìn)一步地，在步驟(2)中，脫Fmoc使用的試劑為15-25％的哌啶/DMF。