[發明專利]包含白芨提取物的牙膏止血性能體外評價模型和方法

在審

• 申請號: 201911213370.2
• 申請日: 2019-12-02
• 公開（公告）號: CN110849835A
• 公開（公告）日: 2020-02-28
• 發明（設計）人: 吳文惠;郭慶;馮婧文;包斌;郭銳華
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 周一新

本發明公開了包含白芨提取物的牙膏止血性能體外評價模型和方法，其評價指標包括血小板聚集率、環磷酸腺苷(cAMP)和血栓素B₂(TXB₂)含量中至少一種；采集動物動脈血，離心，調整血漿濃度，檢測其空白時的吸光度OD₀；將包含不同濃度白芨提取物的牙膏樣品和對照樣品分別加入到裝有血漿的孔板內，輕微震蕩，37℃恒溫孵育充分反應，加入二磷酸腺苷溶液誘導血小板聚集反應；待上述反應體系內濁度發生變化時，測試血漿吸光度OD_t、cAMP和TXB₂的含量并計算血小板聚集率，用于評估牙膏止血性能。本發明不僅有效地減少和避免實驗動物的使用，還可以大大提高牙膏配方研究工作效率，降低體內試驗成本。

技術領域

本發明涉及口腔護理產品性能測試技術領域，涉及評價包含白芨提取物的牙膏止血性能，特別涉及構建一種包含白芨提取物的牙膏止血性能體外評價模型，用于評價該牙膏的止血性能。

背景技術

如今人們的口腔問題如齲齒、口臭、牙齦炎、牙周炎和牙敏感等越來越突出，對口腔護理產品的品質和功能要求也越來越高。但是，驗證口腔護理原料及產品的抗炎和修復功能等仍是行業難點，傳統的測試方法是通過動物實驗進行驗證。2009年3月，歐盟化妝品法規(EC)1223/2009正式實施，要求禁止對化妝品成分進行動物實驗，并且禁止對成品或者成分進行過局部/急性動物實驗的化妝品銷售。顯然，對化妝品原料和成品禁止動物實驗將是未來趨勢。隨著口腔護理產品被納入化妝品管理，如何能更加便捷且有效地篩選原料以及驗證產品功效成為業內關注的焦點。

白芨(Blettila striata)，其藥用價值從古至今均有明確記載，用于體內外出血癥、燒燙傷、抗補體活性、治療腫瘤等，我國白芨的種植面積位居世界首位，其中許多成分都具有較高藥用價值和營養價值，如聯芐類和菲類等由于其廣泛的醫學用途而備受關注，白芨膠粉和白芨葡甘聚糖膠作為醫藥原料、藥用輔料和生物醫學材料安全高效且性能好。血小板是一種膜結構的血液成分，在血液中發揮作用，主要是靠多種表面受體及存在于血小板中的可溶性介質來進行。在正常的血液循環過程中，血小板處于穩定的靜止狀態，當血管壁出現損傷時，通過表面接觸和某些凝血因子的作用，血小板轉入激活狀態，出現凝集現象。白芨可通過增強血小板TXA₂的活性進而增加TXB₂含量，縮短凝血酶原時間，抑制纖維蛋白酶活性從而降低血漿中cAMP含量，使血細胞凝集形成人工血栓達到止血效果。但是，現有技術中僅簡述白芨牙膏具有預防口腔出血效果，對其含量沒有做過具體比較分析，且對其止血方面的研究較淺顯，僅在凝血時間、凝血酶原等方面做局部研究。

發明內容

本發明基于藥物研發前期先導化合物篩選的體外細胞實驗，立足于白芨提取物的篩選以及其口腔護理產品的功效測試，構建一種包含白芨提取物的牙膏止血性能體外評價模型替代動物實驗，用于口腔護理產品原料篩選或產品功效驗證，特別用于評價該牙膏的止血性能。

本發明還通過上述體外評價模型可量化評價內含白芨提取物的牙膏止血效果。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

包含白芨提取物的牙膏止血性能體外評價模型，其評價指標包括血小板聚集率、環磷酸腺苷(cAMP)和血栓素B₂(TXB₂)中至少一種；

所述體外評價模型的構建方法包含以下步驟：

(ⅰ)采集動物動脈血，離心，提取血小板密度為1×10¹²/L的血漿置于96孔板內，檢測其空白時的吸光度OD₀；

(ⅱ)將包含不同濃度白芨提取物的牙膏樣品和對照樣品分別加入到步驟(ⅰ)的孔板內，輕微震蕩，于37℃恒溫孵育至充分反應；和

(ⅲ)加入5uL的10uM二磷酸腺苷(ADP)溶液，輕微震蕩，誘導血小板聚集反應；