[發明專利]一種油菜BnFAD2基因高油酸等位突變及其SNP標記引物的開發和應用

有效

• 申請號: 201911212000.7
• 申請日: 2019-12-02
• 公開（公告）號: CN110760608B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 傅鷹;張堯鋒;張冬青;余華勝;林寶剛
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 杭州恒翌專利代理事務所(特殊普通合伙) 33298
• 代理人: 王從友

本發明涉及一種油菜BnFAD2基因的新型的高油酸等位突變，并且涉及這類新型的高油酸等位變異SNP分子標記開發和分子標記輔助育種技術。本發明公開了甘藍型油菜中BnFAD2基因的兩對新型的高油酸等位突變（BnAfad2a和BnCfad2a）。所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和ID NO：2所述。本發明還同時提供了可快速篩選這類新型高油酸等位突變位點的兩對特異型的KASP分子標記KASP?421和KASP?1073，并利用該標記進行單株基因型鑒定和高油酸株系篩選。本發明提供的兩對KASP分子標記均由油菜BnFAD2基因外顯子區域SNP變異開發而來，篩選結果特異性更高，檢測結果更為準確可靠。本發明提供的KASP分子標記只需PCR和熒光檢測兩個步驟，成本低、通量高，特別適用于育種群體后代高油酸基因型的分類篩選與鑒定。本發明兩個分子標記的組合使用可以篩選得到油酸含量高達88%的后代材料。

技術領域

本申請涉及一種新型的油菜BnFAD2基因高油酸等位突變，并且涉及這類新型的高油酸等位變異SNP分子標記開發和分子標記輔助育種技術。

背景技術

油菜是我國繼水稻、小麥、玉米和大豆之后的第五大農作物，也是世界上最重要的油料作物之一。菜籽油中脂肪酸組分對其食用品質、營養價值、存儲和加工品質、用途和最終的市場價值有著決定性的影響。菜籽油的脂肪酸組成主要有棕櫚酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、油酸(C18:1)、亞油酸(C18:2)、亞麻酸(C18:3)、廿碳烯酸(C20:1)、芥酸(C22:1)等。其中，油酸是油菜脂肪酸的重要成分，屬于單不飽和脂肪酸。油酸含量的提升對于進一步改良菜籽油品質有著重大意義：(1)能夠顯著降低血漿中低密度脂蛋白膽固醇，預防人類動脈硬化等心血管疾??；(2)可以在對胰島素分泌沒有影響的前提下，顯著提高胰島素敏感性，從而對于治療糖尿病起到積極作用；(3)因其不飽和程度低，在加工、儲運和煎炸時對氧化不敏感，具有很好的熱穩定性，能夠滿足如煎炸、糕點等食品加工行業的需要，并且可使菜籽油具有更長的貨架期；(4)高油酸菜籽油因其甲酯化程度高，燃燒值高，更有利于生產生物柴油，并另外，油酸還可用于制備多種化工產品和口紅、皂類、唇膏、防曬霜等生活用品和日用化妝品。

分子標記因其準確、快速、高效已經成為作物育種一個強有力的工具，因其具有早期選擇、不受環境影響以及準確快速高效的優勢，該技術已在各種作物中開展了實質性利用。分子標記的種類很多，目前在作物中已經開展實質性利用的標記包括早期的RFLP(限制性片段長度多態性，Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP)、RAPD(隨機擴增多態性， Random Amplified Polymorphism DNA，RAPD)、AFLP(擴增片段長度多態性，Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP)，發展到目前使用的最為廣泛的SSR(簡單重復序列，Simple Sequence Repeat，SSR)、CAPS(酶切擴增多態性序列，CleavedAmplified Polymorphic Sequence，CAPS)標記。但這些方法都存在低通量或高成本等局限性。KASP(競爭性等位基因特異性PCR,kompetitive allele specific PCR)是英國LGC(政府化學家實驗室)公司提出的一種用于對基因組中SNPs和特定位點上InDels進行精準雙等位基因判斷的技術。KASP分子標記具有高穩定性、高準確性、低成本、快速、高效等優點，尤其在樣本量大,SNP位點少時，KASP 的應用特點最為顯著。