[發明專利]一種左旋多巴的生物合成方法有效
| 申請號： | 201911207728.0 | 申請日： | 2019-11-30 |
| 公開（公告）號： | CN110791536B | 公開（公告）日： | 2023-01-17 |
| 發明（設計）人： | 于麗娟;馮怡;金大勇;曹加偉 | 申請（專利權）人： | 南通大學 |
| 主分類號： | C12P13/22 | 分類號： | C12P13/22;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 226019*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 左旋多巴 生物 合成 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種左旋多巴的生物合成方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）將表達有酪氨酸酚裂解酶的重組大腸桿菌細胞按照細胞濕重1~20 g/L與含有丙酮酸銨1~5 g/L，鄰苯二酚1.6-8 g/L的水溶液混合均勻，氨水調節pH 7.5~8.0，16℃溫度條件下，抽真空攪拌催化反應3 h，得到反應混合液；
所述表達有酪氨酸酚裂解酶的重組大腸桿菌細胞的制備方法按如下步驟：
1）將基因序列如SEQ ID NO.1所示的酪氨酸酚裂解酶基因進行密碼子優化后，插入到質粒pJJDuet30上的SacⅡ和BamHⅠ限制性酶切位點之間，使該核苷酸序列位于T7啟動子的下游并受其調控，得到重組表達載體pJJ-dhtpl；
2）用重組表達載體pJJ-dhtpl轉化大腸桿菌，獲得大腸桿菌基因工程菌BL21/pJJ-dhtpl；
3）將大腸桿菌基因工程菌BL21/pJJ-dhtpl在發酵罐中進行發酵，誘導重組酪氨酸酚裂解酶的表達；
4）離心，獲得表達有酪氨酸酚裂解酶的重組大腸桿菌細胞；
（2）向步驟（1）得到的反應混合液中加入丙酮酸銨和鄰苯二酚，使所述丙酮酸銨的終濃度為1~5 g/L，所述鄰苯二酚的終濃度為1.6~8 g/L，繼續抽真空攪拌催化反應3 h，重復該步驟8~10次；
（3）反應結束后，收集底部結晶物，洗滌，重結晶，得左旋多巴。
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