[發(fā)明專利]一種1,5-脫水葡萄糖醇的唾液無創(chuàng)檢測方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911207125.0
• 申請日: 2019-11-29
• 公開（公告）號: CN110988165B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 包玉倩;賈偉;趙愛華;周健;馬曉靜;王煜非;菅朝慧
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市第六人民醫(yī)院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 郎祺

本發(fā)明一方面提供了一種1,5?脫水葡萄糖醇的唾液無創(chuàng)檢測方法，用唾液采集管收集測試個體的唾液樣本并進(jìn)行液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析，可精確定量唾液1,5?AG水平，避免了血液檢測給患者帶來的痛苦和感染風(fēng)險以及試劑盒交叉反應(yīng)所致的不準(zhǔn)確性。本發(fā)明的另一方面提供了上述方法在在篩查糖尿病中的應(yīng)用，根據(jù)檢測的唾液1,5?脫水葡萄糖醇水平或通過聯(lián)合唾液1,5?脫水葡萄糖水平與空腹血糖或糖化血紅蛋白，用于篩查糖尿病，提高了糖尿病的篩查效率，同時可減少行OGTT的人數(shù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物標(biāo)志物的測定方法領(lǐng)域，具體涉及一種1,5-脫水葡萄糖醇的唾液無創(chuàng)檢測方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

目前糖尿病已發(fā)展成為一個全球性的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題，給家庭和社會帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，血糖控制欠佳導(dǎo)致的糖尿病慢性并發(fā)癥已成為糖尿病患者早亡和喪失勞動力的重要原因。據(jù)2017年國際糖尿病聯(lián)盟評估，全球約有4.25億20～79歲的成人糖尿病患者，患病率為8.8％，預(yù)計2045年全球糖尿病患病人數(shù)將達(dá)6.29億。在20～79歲人群中約有400萬人死于糖尿病，相當(dāng)于每8秒就有1人死亡。糖尿病占全球全因死亡數(shù)量的10.7％，高于傳染性疾病致死數(shù)的總和。但在如此龐大的患病人口中糖尿病未確診人數(shù)高達(dá)2.124億人，各地區(qū)未確診率從37.6％～69.2％不等。

血糖監(jiān)測是篩查糖尿病及評估糖尿病患者血糖控制水平不可或缺的手段，現(xiàn)有的常規(guī)方法包括糖化血紅蛋白(HbA1c)、糖化白蛋白、持續(xù)葡萄糖監(jiān)測和患者利用血糖儀進(jìn)行的自我血糖監(jiān)測。2003年美國FDA批準(zhǔn)將血清1,5-AG(1,5-Anhydroglucitol，1,5-AG)作為評價短期血糖監(jiān)測的新指標(biāo)，2015年《中國血糖監(jiān)測臨床應(yīng)用指南》亦將血清1,5-AG列入輔助血糖監(jiān)測的指標(biāo)。由于飲食習(xí)慣，中國糖尿病人群多表現(xiàn)為餐后血糖升高，而1,5-AG在反映血糖波動和餐后高血糖的效能尤其顯著，既往圍繞血清1,5-AG的研究顯示1,5-AG水平在糖負(fù)荷后保持穩(wěn)定，可非空腹使用；且1,5-AG聯(lián)合空腹血糖可提高中國人群糖尿病篩查效率。且已有研究報道唾液1,5-AG水平在糖尿病患者中顯著降低，用于未診斷糖尿病的篩查具有一定前景。

但常規(guī)基于血液的檢測，需要進(jìn)行有創(chuàng)靜脈穿刺或針刺，一定程度上給患者帶來痛苦及感染風(fēng)險，并會影響患者血糖監(jiān)測的積極性，且采用血清1,5-AG試劑盒檢測唾液樣本準(zhǔn)確性欠佳。因此需要探索無創(chuàng)準(zhǔn)確的檢測方式用于糖尿病的篩查。這種方法快速便捷可用于大群體的篩查，且針對中國人群的血糖特點有良好的篩查效能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種1,5-脫水葡萄糖醇的唾液無創(chuàng)檢測方法及其應(yīng)用。本發(fā)明所采用的的唾液無創(chuàng)檢測方法顯著提高唾液1,5-AG檢測的準(zhǔn)確性，并且為糖尿病篩查提供了一種無創(chuàng)便捷的方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明的第一方面是提供一種1,5-脫水葡萄糖醇的唾液無創(chuàng)檢測方法，包括如下步驟：

步驟一，用唾液采集管收集測試個體的唾液樣本；

步驟二，將步驟一所采集的唾液樣本與乙腈：甲醇溶液混合后預(yù)處理；

步驟三，將預(yù)處理后的樣本進(jìn)行液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析。

進(jìn)一步地，步驟一的唾液樣本的采集方法為采集前至少30分鐘刷牙或漱口，保持口腔無刺激，時間≥30分鐘，咀嚼唾液采集管匹配的棉棒。

進(jìn)一步地，咀嚼唾液采集管匹配的棉棒1分鐘，咀嚼次數(shù)為40～50次。

進(jìn)一步地，步驟二乙腈：甲醇溶液中的乙腈和甲醇的體積比值為8：2。

進(jìn)一步地，步驟二中預(yù)處理的操作過程為混合后的溶液渦旋3-8分鐘后，于-20℃冷凍，離心，取上清液待進(jìn)樣測試。

進(jìn)一步地，步驟三中的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析的步驟或參數(shù)如下：