[發(fā)明專利]一種快速突變Y染色體STR分型系統(tǒng)、下一代測序分型試劑盒及分型方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911206540.4
• 申請日: 2019-11-29
• 公開（公告）號: CN110846420B
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李淑瑾;叢斌;陳璐;王嘉茜;馬春玲;盧朝龍
• 申請（專利權(quán)）人: 河北醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6869
• 代理公司: 石家莊國為知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 13120
• 代理人: 張沙沙

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種快速突變Y染色體STR分型系統(tǒng)、下一代測序分型試劑盒及分型方法和應(yīng)用。該分型體系覆蓋了19個基因座，能夠從長度多態(tài)性和序列多態(tài)性兩方面對樣品進行全面分析，系統(tǒng)效能高，男性個體單倍型差異度大，可大大提高男性親緣個體識別的靈敏度，并可應(yīng)用于男性同卵雙生子辨別。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種快速突變Y染色體STR?分型系統(tǒng)、下一代測序分型試劑盒及分型方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

在涉及男性犯罪嫌疑人的案例中，Y-STR(Y染色體STR)可以用于排查男性家系，縮小偵查范圍，但常規(guī)Y-STR在同一男性家系中大多表現(xiàn)一致的單倍型，所以不能用于男性親緣個體識別，包括同卵雙生兄弟。據(jù)文獻報道，RM?Y-STR(快速突變Y染色體STR)經(jīng)群體研究發(fā)現(xiàn)，其突變率高，具有男性親緣個體辨別能力，僅13個位點經(jīng)過毛細管電泳分型技術(shù)便可區(qū)分近70％的父子，56％的兄弟和67％的堂兄弟。但RM?Y-STR具有高突變率、多拷貝和復(fù)雜核心重復(fù)結(jié)構(gòu)等特點，毛細管電泳技術(shù)僅能夠發(fā)現(xiàn)其長度多態(tài)性，而不能發(fā)現(xiàn)其序列多態(tài)性信息，尚未報道能應(yīng)用于成功區(qū)分男性同卵雙生兄弟。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有RM?Y-STR不能區(qū)分男性同卵雙生兄弟的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種快速突變Y染色體STR分型系統(tǒng)。

以及，本發(fā)明還提供了一種快速突變Y染色體STR下一代測序分型試劑盒。

以及，本發(fā)明還提供了一種快速突變Y染色體STR的下一代測序分型方法。

為達到上述發(fā)明目的，本發(fā)明實施例采用了如下的技術(shù)方案：

一種快速突變Y染色體STR分型系統(tǒng)，包括19個基因座，所述19個基因座為：DYS630、DYS464、DYF403S1a、DYF403S1b1、DYF403S1b2、DYF399S1、DYS518、DYS527、DYS713、DYS612、DYS627、DYS526a、DYS526b、DYF404S1、?DYF387S1、DYS449、DYS547、DYS570、DYS576。

本系統(tǒng)覆蓋了19個基因座，能夠從長度多態(tài)性和序列多態(tài)性兩方面對樣品進行全面分析，與毛細管電泳分析技術(shù)相比，增加了位點數(shù)目、序列多態(tài)性信息，提高了系統(tǒng)效能，增加了男性個體單倍型差異度，從而大大提高男性親緣個體識別的靈敏度，并可應(yīng)用于男性同卵雙生子辨別，為涉及男性個體識別甚至男性同卵雙生個體鑒別提供了科學(xué)方法。

以及，本發(fā)明還提供了一種快速突變Y染色體STR下一代測序分型試劑盒，所述下一代測序分型試劑盒包括下一代測序定制panel試劑盒，所述下一代測序定制panel試劑盒中包括上述19個基因座的68條PCR擴增特異性引物，所述PCR擴增特異性引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.68所示。上述PCR擴增特異性引物高度覆蓋該19個基因座，覆蓋度99％。

優(yōu)選地，所述下一代測序分型試劑盒還包括FuPa試劑、Ampliseq?CD?Indexes和Lib?Amp?Mix。Ampliseq?CD?Indexes是以孔為唯一單位的雙端標簽接頭預(yù)混液，即每個孔內(nèi)為兩種標簽序列和通用接頭序列，每一個孔道兩種標簽序列代表唯一組合，能夠幫助區(qū)分和確定唯一樣本。FuPa試劑和Lib?Amp?Mix?均適用于利用上述68條PCR擴增特異性引物構(gòu)建文庫的過程。

優(yōu)選地，所述下一代測序分型試劑盒還包括血液DNA提取試劑盒、DNA?定量試劑盒和實時熒光定量檢測試劑盒。

優(yōu)選地，所述下一代測序分型試劑盒還包括MiSeq上機測序試劑，使該試劑盒能夠在MiSeq平臺進行下一代測序分型。

以及，本發(fā)明實施例還提供了一種快速突變Y染色體STR下一代測序分型方法，所述方法中用上述試劑盒進行樣品檢測。

優(yōu)選地，所述下一代測序分型方法至少包括以下操作步驟：