[發(fā)明專利]一種快速突變Y染色體STR分型系統(tǒng)、下一代測(cè)序分型試劑盒及分型方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911206540.4
• 申請(qǐng)日: 2019-11-29
• 公開（公告）號(hào): CN110846420B
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李淑瑾;叢斌;陳璐;王嘉茜;馬春玲;盧朝龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6869
• 代理公司: 石家莊國(guó)為知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 13120
• 代理人: 張沙沙

1.一種快速突變Y染色體STR下一代測(cè)序分型試劑盒，其特征在于：所述下一代測(cè)序分型試劑盒包括下一代測(cè)序定制panel試劑盒，所述下一代測(cè)序定制panel試劑盒中包括擴(kuò)增19個(gè)基因座的68條PCR擴(kuò)增特異性引物，所述PCR擴(kuò)增特異性引物的核苷酸序列如SEQ?IDNO.1~SEQ?ID?NO.68所示，所述19個(gè)基因座為DYS630、DYS464、DYF403S1a、DYF403S1b1、DYF403S1b2、DYF399S1、DYS518、DYS527、DYS713、DYS612、DYS627、DYS526a、DYS526b、DYF404S1、DYF387S1、DYS449、DYS547、DYS570、DYS576。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速突變Y染色體STR下一代測(cè)序分型試劑盒，其特征在于：所述下一代測(cè)序定制panel試劑盒還包括FuPa試劑、Ampliseq?CD?Indexes和Lib?Amp?Mix。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的下一代測(cè)序分型試劑盒，其特征在于：所述下一代測(cè)序分型試劑盒還包括MiSeq上機(jī)測(cè)序試劑。

4.一種快速突變Y染色體STR下一代測(cè)序分型方法，其特征在于：用權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述快速突變Y染色體STR下一代測(cè)序分型試劑盒進(jìn)行樣品檢測(cè)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的快速突變Y染色體STR下一代測(cè)序分型方法，其特征在于：所述方法至少包括以下操作步驟：

步驟a、提取待測(cè)血液的DNA，定量，采用上述試劑盒中的68條PCR擴(kuò)增特異性引物構(gòu)建文庫(kù)；

步驟b、對(duì)所述文庫(kù)進(jìn)行片段檢測(cè)，定量；

步驟c、根據(jù)步驟b的定量結(jié)果，對(duì)文庫(kù)中的樣本進(jìn)行均一化，然后變性、稀釋，測(cè)序；

步驟d、將測(cè)序結(jié)果進(jìn)行序列對(duì)比，得到分型結(jié)果。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的快速突變Y染色體STR下一代測(cè)序分型方法，其特征在于：步驟a中構(gòu)建文庫(kù)的操作包括靶片段擴(kuò)增，擴(kuò)增子部分消化，連接標(biāo)簽接頭序列，文庫(kù)一次清洗，文庫(kù)擴(kuò)增，文庫(kù)二次清洗；所述靶片段擴(kuò)增的引物為所述68條擴(kuò)增特異性引物；和/或

步驟c中所述稀釋為將所述文庫(kù)的樣本濃度稀釋至18pM；和/或

步驟c中所述測(cè)序的操作在Illumina?MiSeq?FGx平臺(tái)進(jìn)行。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的快速突變Y染色體STR下一代測(cè)序分型方法，其特征在于：所述靶片段擴(kuò)增的PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)為：99℃，2min；99℃，15s，60℃，4min，21次循環(huán)；10℃，4min~24h；和/或

所述擴(kuò)增子部分消化的方法為用FuPa試劑進(jìn)行擴(kuò)增子部分消化，消化的參數(shù)為：50℃，10min；55℃，10min；62℃，20min；10℃，＜1h；和/或

所述文庫(kù)擴(kuò)增的程序?yàn)椋?8℃，2min；98℃，15s，64℃，1min，7次循環(huán)；10℃，4min~24h。

8.權(quán)利要求4~7任一項(xiàng)所述的快速突變Y染色體STR下一代測(cè)序分型方法在鑒別男性同卵雙生子中的應(yīng)用。