[發明專利]脂多糖在建立人牙齦成纖維細胞應激衰老模型中的應用

在審

• 申請號: 201911203224.1
• 申請日: 2019-11-29
• 公開（公告）號: CN110862957A
• 公開（公告）日: 2020-03-06
• 發明（設計）人: 李樂;張艷云;盧永波
• 申請（專利權）人: 廣東博溪生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12Q1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種脂多糖在建立人牙齦成纖維細胞應激衰老模型中的應用、方法及人牙齦成纖維細胞應激衰老模型。本發明提供的人牙齦成纖維細胞應激衰老模型可以更全面的反映非增齡性的應激口腔衰老，為口腔抗衰類產品功效性評價提供一個更加客觀、科學和準確的評價模式。

技術領域

本發明屬于護膚品或化學物質安全性檢測技術領域，具體涉及脂多糖在建立人牙齦成纖維細胞應激衰老模型中的應用、方法及人牙齦成纖維細胞應激衰老模型。

背景技術

衰老是自然界一切生命由遺傳因素和內外環境相互作用下的生物學過程，這個過程從出生、發育、成長直到死亡，是機體功能退行性下降及紊亂的綜合變化。在人們注重皮膚等身體機能的老化時，口腔組織的衰老也受到了更多的關注?？谇唤M織的結構及其功能衰老的主要表現為齲病、牙菌斑和牙周組織病變導致的牙齦裸露、牙齒敏感和松動。與此同時，具有抗衰功效的口腔類護理產品逐漸進入大眾的視野，并且受眾越來越年輕化，也是各大口腔類產品公司和研究機構的重要研究領域范疇，他們投入大量的人力物力用于新型口腔抗衰產品的開發，然而目前還沒有令人信服的用于檢測此類產品抗衰功效的體外口腔衰老模型。人牙齦成纖維細胞（human gingival fibroblasts，hGFs）是健康牙齦組織的主要間質細胞，能夠合成分泌膠原、基質并吞噬異物，抵抗外界物理、化學及微生物刺激的能力，在牙齦、牙周組織生理和病理變化研究中起到重要作用，多用于口腔類產品體外功效檢測。截止目前，用于檢測口腔類產品抗衰功效的衰老模型主要有：復制性衰老模型、氧化性衰老模型。

復制性衰老模型：收集健康的牙齦組織樣，采用組織塊法體外原代培養健康的人牙齦成纖維細胞，進行連續傳代培養構建牙齦衰老模型，其衰老狀態可通過累積細胞群體倍增指數（cumulative population doublings，CPD）、CCK-8法檢測細胞增殖能力及real-time PCR檢測衰老相關基因p16^INK4α、p21^Cipl 的表達情況進行評估。

氧化性衰老模型：采用紫外（UV）輻照、過氧化氫及煙草提取物等刺激物對體外培養的健康人牙齦成纖維細胞進行快速的氧化性刺激，其衰老狀態可通過流式細胞儀檢測活性氧簇ROS（reactive oxygen species）含量、MTT法檢測細胞活力及real-time PCR檢測基質金屬蛋白酶基因MMP等表達情況進行評估，其中活性氧簇ROS含量是關鍵指標。

上述兩種口腔衰老模型用于評價口腔類產品抗衰功效時各有利弊。復制性衰老模型構建方法簡單，無需額外刺激物，只需進行體外連續傳代培養，能反映在正常無外界刺激的條件下，個體從年輕到衰老過程中細胞所發生的生物學變化，模擬細胞正常衰老的連續性過程。但是這種模型僅適用于增齡性衰老，目前口腔類疾病的發生人群越來越年輕化，因此這種復制性口腔衰老模型并不適用于通過化學損傷、氧化應激損傷或激活相關信號通路等細胞內外的應激因素引起細胞短時間內出現不依賴于端?？s短的衰老。氧化性衰老模型屬于應激早衰（stress-induced premature senescence，SIPS），可以反映由于化學損傷與氧化應激損傷如煙草、輻射等日常生活中的外界因素導致的口腔衰老。然而，導致非增齡性的口腔衰老的誘因有很多，包括微生物、遺傳及環境因素等，氧化性口腔衰老模型僅能反映部分環境因素導致的衰老，適用范圍依舊有限。因此，需要一種非增齡性的、適用范圍更廣的應激性口腔衰老模型，以便通過更為完善的檢測體系評價口腔類產品的抗衰功效。

發明內容

本發明的目的在于，針對現有技術存在的問題，提供一種脂多糖在建立人牙齦成纖維細胞應激衰老模型中的應用、方法及人牙齦成纖維細胞應激衰老模型。

為實現本發明的目的，本發明提供以下技術方案：

本發明第一方面提供一種脂多糖在建立人牙齦成纖維細胞應激衰老模型中的應用。

優選地，脂多糖在建立人牙齦成纖維細胞應激衰老模型中的應用過程為：