[發明專利]一種同時檢測多種病原微生物的引物探針組合、試劑盒以及方法

在審

• 申請號: 201911200522.5
• 申請日: 2019-11-29
• 公開（公告）號: CN110904272A
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 王艷;莊裕華
• 申請（專利權）人: 上海海關動植物與食品檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 余永莉

本發明提供一種同時檢測多種病原微生物的引物探針組合、試劑盒以及方法，包括：用于檢測呼腸孤病毒的引物對、探針序列如SEQ ID NO：1?3所示；用于檢測牛細小病毒的引物對、探針序列如SEQ ID NO：4?6所示；用于檢測藍舌病毒的引物對、探針序列如SEQ ID NO：7?9所示；用于檢測牛腹瀉病毒的引物對、探針序列如SEQ ID NO：10?12所示；用于檢測牛多瘤病毒的引物對、探針序列如SEQ ID NO：13?15所示；以及用于檢測狂犬病毒的引物對、探針序列如SEQ ID NO：16?18所示。根據本發明，提供了一種簡單、快速、靈敏度高同時檢測多種病原微生物的引物探針組合、試劑盒和方法。

技術領域

本發明涉及微生物檢測技術領域，更具體地涉及一種同時檢測多種病原 微生物的引物探針組合、試劑盒以及方法。

背景技術

生物制品的出現對人類的健康和生活質量的提高有非常特殊的意義。隨 著我國生物醫藥的發展，對血清的需求以每年25％的速度增長，對外依存度越 來越高。牛血清在疫苗生產中被大量使用，其質量直接影響生物制品的質量安 全，特別是病毒類生物活性物質污染會嚴重影響制品的質量安全。日本東京大 學的Harasawa等報道，在5批人用麻風腮及風疹疫苗成品中檢出了牛腹瀉病 毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)RNA。Wessman等報道，由于使用了污染 BVDV的胎牛血清，已經導致了胎牛腎細胞、牛腎細胞、牛鼻甲骨細胞、豬腎 細胞、貓腎細胞核Vero細胞等多種細胞系的污染。

牛腹瀉病毒是疫苗生產中常見的污染物及嚴重的外源性致病原之一，因 此牛血清中BVDV的檢測尤為重要。此外，呼腸孤病毒(reoviridae,REOV)、 牛細小病毒(bovineparvovius,BPV)、藍舌病毒(bluetongue virus,BTV)、牛多瘤 病毒(bovine ploymavirus,BPyV)、狂犬病毒(Rabies virus,RABV)也是牛血清中 重要的病原外源因子，由于牛血清質量的把關是生物制品質量的重要環節，因 此建立外源性病毒快速檢測方法，將有助于把控牛血清質量，防止外源病毒的 污染。

然而，傳統的檢測方法一次只能檢測單一病原，因此建立快速的、高通 量檢測方法對于把關生物制品的安全至關重要。如今研究的趨勢更是進一步轉 向了在一個檢測平臺上同時檢測多種病原微生物或者檢測多種動物的同一病 原微生物，以此縮短檢測周期、減少檢測成本。因此，能同時快速有效檢測多 種病原微生物的高通量檢測技術已成為生物制品病原檢測和公共安全等領域 研究的熱點。

發明內容

本發明的目的是提供一種同時檢測多種病原微生物的引物探針組合、試 劑盒以及方法，從而解決現有技術中缺乏能夠快速有效同時檢測呼腸孤病毒、 牛細小病毒、藍舌病毒、牛腹瀉病毒、牛多瘤病毒、狂犬病毒的方法的問題。

為了解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案：

根據本發明的第一方面，提供一種同時檢測多種病原微生物的引物探針 組合，該引物探針組合包括：用于檢測呼腸孤病毒的如SEQ ID NO：1-2所示 的特異性引物對，如SEQID NO：3所示的特異性探針；用于檢測牛細小病毒 的如SEQ ID NO：4-5所示的特異性引物對，如SEQ ID NO：6所示的特異性 探針；用于檢測藍舌病毒的如SEQ ID NO：7-8所示的特異性引物對，如SEQ ID NO：9所示的特異性探針；用于檢測牛腹瀉病毒的如SEQ ID NO：10-11所示的特異性引物對，如SEQ ID NO：12所示的特異性探針；用于檢測牛多 瘤病毒的如SEQID NO：13-14所示的特異性引物對，如SEQ ID NO：15所示 的特異性探針；以及用于檢測狂犬病毒的如SEQ ID NO：16-17所示的特異性 引物對，如SEQ ID NO：18所示的特異性探針。

優選地，所述特異性探針的5’端修飾的活性有機基團為氨基。