[發(fā)明專利]一種紫菜功能基因過表達質粒的構建方法和應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201911196420.0 | 申請日： | 2019-11-29 |
| 公開（公告）號： | CN110777162A | 公開（公告）日： | 2020-02-11 |
| 發(fā)明（設計）人： | 王廣策;鄭陣兵;何幫翔 | 申請（專利權）人： | 中國科學院海洋研究所 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;C12N15/66;A01H13/00 |
| 代理公司： | 21002 沈陽科苑專利商標代理有限公司 | 代理人： | 何薇;李穎 |
| 地址： | 266071 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 功能基因 紫菜 表達質粒 條斑紫菜 構建 分子生物學研究 引物對擴增 關鍵基因 有效途徑 作用機制 光系統(tǒng)I 光天線 海洋生物 質粒 成功率 蛋白 篩選 基因 應用 研究 | ||
1.一種紫菜功能基因過表達質粒的構建方法，其特征在于：利用引物對擴增條斑紫菜光系統(tǒng)I捕光天線蛋白LHCI基因的CDS序列，而后將其連接至質粒PEA7上，即獲得條斑紫菜功能基因過表達質粒；
引物對：F:agcaagcccggatccatgttgg gctttgcgtcg，R：agatctgagtccggactagtggtggtggtggtggtgcgggaagagcttgccg。
2.按權利要求1所述的紫菜功能基因過表達質粒的構建方法，其特征在于：所述條斑紫菜光系統(tǒng)I捕光天線蛋白LHCI基因的CDS序列插入質粒PEA7的啟動子和終止子之間，并在終止子前加入6個組氨酸密碼子gtg作為蛋白表達驗證標簽。
3.按權利要求1或2所述的紫菜功能基因過表達質粒的構建方法，其特征在于：
1)提取條斑紫菜總RNA，反轉成cDNA；
2)以上述cDNA為模板，通過引物對PCR擴增LHCI基因；
3)回收PCR產物，獲得目的基因；將其連接至質粒PEA7的啟動子和終止子之間，即構建得LHCI功能基因表達載體；其中，啟動子為紫菜PyAct1，終止子為NOS。
4.按權利要求3所述的條斑紫菜功能基因過表達質粒的構建方法，其特征在于：所述PCR擴增反應條件為：95℃變性30秒，68℃退火30秒，70℃延伸2分鐘，共計35個循環(huán)。
5.一種權利要求1所述方法構建的紫菜功能基因過表達質粒的應用，其特征在于：所述質粒在紫菜內過表達調控紫菜代謝。
6.按權利要求5所述的應用，其特征在于：將所述質粒通過基因槍的方法進行質粒轉化，所述宿主為紫菜葉狀體。
7.一種紫菜的表達載體，其特征在于：載體依次為啟動子、目的基因和終止子，且終止子前引入蛋白表達驗證標簽；所述啟動子為紫菜PyAct1，終止子為NOS。
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