[發明專利]一種H13N8重組流感病毒及應用

在審

• 申請號: 201911195864.2
• 申請日: 2019-11-29
• 公開（公告）號: CN110760486A
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發明（設計）人: 于志君;朱彤;吳家強;陳為京;高月花
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院家禽研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/85;G01N33/68;A61K39/145;A61P31/16
• 代理公司: 37221 濟南圣達知識產權代理有限公司
• 代理人: 張曉鵬

本公開屬于流感疫苗技術領域，具體涉及一種H13N8重組流感病毒及應用。本公開構建了一種H13N8重組流感病毒，通過基因合成獲得PR8病毒的PB2、PB1、PA、NP、M和NS基因，并將合成的基因通過同源重組的方式插入pFluDD雙向表達載體中。將6個PR8病毒內部基因感染性克隆質粒與2個H13N8亞型流感病毒抗原基因感染性克隆按比例共轉染293T細胞，將轉染后的細胞懸液接種SPF雞胚，收獲血凝陽性的雞胚尿囊液，獲得H13N8重組流感病毒。將H13N8重組流感病毒滅活疫苗頸部皮下注射免疫3周齡SPF雞，免疫后第4周，免疫組雞血清中抗H13N8亞型流感病毒的血凝抑制效價達到160?640。

技術領域

本公開屬于流感疫苗技術領域，具體涉及一種H13N8重組流感病毒以及該重組流感病毒作為滅活疫苗的應用。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本公開的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道疾病。流感病毒即可以感染人類也可以感染多種動物，包括陸禽、水禽和野鳥等，對養殖業和公共衛生安全均構成嚴重威脅。流感病毒根據病毒基因組成和序列同源性等可分為A型、B型、C型和D型流感病毒，其中以A型流感病毒危害最大。近一百年來，人類一共發生過四次流感大流行，包括1918年西班牙流感、1957年亞洲流感、1968年香港流感和2009年甲型H1N1流感，四次流感大流行給人類社會造成重大傷害，研究表明四次流感大流行的病原均為A型流感病毒。

A型流感病毒是RNA病毒，由于病毒RNA聚合酶的錯配率較高，因此病毒基因基因尤其是病毒主要抗原基因血凝素(Hemagglutinin,HA)基因和NA(Neuraminidase,NA)基因極易發生變異。截止目前為止，A型流感病毒一共有16種HA亞型和9種NA亞型。H13亞型流感病毒以往只在野鳥和水禽中被發現，不感染陸禽。發明人所在研究團隊從2016年至今通過血清學調查在蛋雞中發現H13亞型流感病毒存在的血清學證據，并在樣品中檢測到H13亞型流感病毒核酸的存在。以上研究結果表明H13亞型流感病毒對蛋雞構成潛在威脅，由此有必要開展H13亞型流感病毒疫苗的研制，以應對將來出現的疫情威脅。

發明內容

基于上述研究背景，本公開構建了一種H13N8重組流感病毒，以流感病毒雞胚適應株A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai(H1N1)(簡稱PR8病毒)作為骨架，包含H13N8亞型流感病毒抗原，其滅活后的產品用于蛋雞免疫具有良好的血凝抑制效價。

基于上述研究結果，本公開提供以下技術方案：

本公開第一方面，提供一種H13N8重組流感病毒，所述重組流感病毒以雞胚適應株PR8病毒內部基因為骨架，以H13N8亞型流感病毒的HA和NA基因為抗原；所述PR8病毒內部基因為PB2、PB1、PA、NP、M和NS基因。

優選的，所述PB2基因序列如SEQ ID NO:1所示；

優選的，所述PB1基因序列如SEQ ID NO:2所示；

優選的，所述PA基因序列如SEQ ID NO:3所示；

優選的，所述NP基因序列如SEQ ID NO:4所示；

優選的，所述M基因序列如SEQ ID NO:5所示；

優選的，所述NS基因序列如SEQ ID NO:6所示；

優選的，所述HA基因序列如SEQ ID NO:7所示；

優選的，所述NA基因序列如SEQ ID NO:8所示。