[發明專利]一種大鼠煙氣吸入暴露后尿液的致突變檢測方法

有效

• 申請號: 201911191721.4
• 申請日: 2019-11-28
• 公開（公告）號: CN110656154B
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發明（設計）人: 蔡繼寶;蘇加坤;郭磊;徐達;羅娟敏;尚平平;李翔;謝復煒
• 申請（專利權）人: 江西中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/42
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種大鼠煙氣吸入暴露后尿液的致突變檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.尿液酶解

將預先收集的尿樣解凍至室溫，取5 mL于玻璃瓶中，依次加入8~15mL 乙酸鈉-乙酸緩沖液和50 μL β-葡萄糖醛酸酶，混合均勻后放入恒溫水浴槽中，在37 ℃下避光酶解14~20h；

S2.過柱和萃取

稱取XAD-2吸附劑1.05±0.05 g，置入層析柱內，首先用甲醇5~10mL浸潤萃取，近流完時，加入5~10mL水來進行預處理，近流完時，加入酶解的尿樣；

S3.洗脫

加入去離子水5~8 mL沖洗層析柱，洗去尿液中存在的組氨酸，棄去沖洗液，隨后加入10~15mL甲醇于層析柱，洗脫XAD-2吸附劑上的尿液物質；

S4.濃縮

洗脫液放入氮吹儀，直至吹干，加入100 μL的二甲基亞砜（DMSO）萃取殘留物；

S5.Ames試驗微量波動法

鼠傷寒沙門氏菌TA98過夜培養后，將菌液稀釋至1~2×10⁸個/mL,將0.1 mL菌液、8.85mL選擇指示生長培養基、0.1 mL尿液DMSO萃取液、0.25 mL的3.2mg%組氨酸、0.25 mL的0.8mg%生物素、1.15mL的10%S9混勻，以0.2 mL/孔加入96孔細胞培養板，48孔/板，37℃培養48h，溶劑對照為DMSO，陽性對照為環磷酰胺；

S6.結果判定

培養48 h后，培養液變為黃色孔為陽性孔，藍紫色孔為陰性孔，介于黃和藍紫色之間的判定為陰性，計數每板的陽性孔數，以卡方檢驗對結果進行差異顯著性比較。

2.根據權利要求1所述的大鼠煙氣吸入暴露后尿液的致突變檢測方法，其特征在于，所述S1步驟中，所述乙酸鈉-乙酸緩沖液的pH為5±0.1。

3.根據權利要求1所述的大鼠煙氣吸入暴露后尿液的致突變檢測方法，其特征在于，所述S1步驟中，所述酶解時間為16h。

4.根據權利要求1所述的大鼠煙氣吸入暴露后尿液的致突變檢測方法，其特征在于，所述S5步驟中，所述選擇指示生長培養基是5 μL/mL溴甲酚紫的Davis-Mingoli緩沖液。