[發明專利]一種高效生產2’-巖藻糖基乳糖的重組菌的構建方法及其應用

有效

• 申請號: 201911188891.7
• 申請日: 2019-11-28
• 公開（公告）號: CN110804577B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 沐萬孟;張文立;李雯;朱鶯鶯;萬李
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P19/18;C12P19/12
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.一種生產2’-巖藻糖基乳糖的大腸桿菌工程菌，其特征在于，組合調控磷酸甘露糖變位酶ManB，甘露糖-1-磷酸鳥嘌呤基轉移酶ManC，GDP-甘露糖-6-脫氫酶Gmd，GDP-巖藻糖合成酶WcaG、L-巖藻糖1-激酶/GDP-巖藻糖焦磷酸化酶Fkp以及2’-巖藻糖基乳糖合成酶FucT2的表達；所述組合調控是采用中拷貝表達元件pCDFDuet-1調控ManB、ManC、Gmd、WcaG的表達，采用高拷貝表達元件pETDuet-1調控Fkp和FucT2的表達；

所述大腸桿菌工程菌以敲除了β-半乳糖苷酶LacZ、UDP-葡萄糖脂質載體轉移酶WcaJ和巖藻糖異構酶/墨角藻糖激酶FucI-FucK基因簇的大腸桿菌BL21（DE3）為宿主菌；

所述ManB、ManC、Gmd、WcaG、Fkp和FucT2的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1~6所示。

2.一種提高大腸桿菌產2’-巖藻糖基乳糖能力的方法，其特征在于，組合調控ManB、ManC、Gmd、WcaG、Fkp以及FucT2的表達，所述組合調控是采用中拷貝表達元件pCDFDuet-1調控ManB、ManC、Gmd、WcaG的表達，采用高拷貝表達元件pETDuet-1調控Fkp和FucT2的表達，所述ManB、ManC、Gmd、WcaG、Fkp和FucT2的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1~6所示。

3.構建權利要求1所述大腸桿菌工程菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）構建敲除wacJ、lacZ和FucI-FucK基因簇的大腸桿菌BL21（DE3）工程菌；

（2）分別以pCDFDuet-1和pETDuet-1為表達載體，構建過表達ManB-ManC-Gmd-WcaG和Fkp-FucT2的重組表達載體；

（3）將步驟（2）構建的pCDFDuet-1-ManB-ManC-Gmd-WcaG和pETDuet-1-Fkp-FucT2同時轉化至步驟（1）構建的敲除wacJ、lacZ和FucI-FucK基因簇的大腸桿菌BL21（DE3）工程菌。

4.一種生產2’-巖藻糖基乳糖的方法，是以權利要求1所述大腸桿菌工程菌為發酵微生物，以甘油或葡萄糖作為碳源，在含乳糖和L-巖藻糖的環境下合成2’-巖藻糖基乳糖。

5.權利要求1所述菌株在制備2’-巖藻糖基乳糖及其衍生產品中的應用。