[發明專利]基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學免疫傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201911187316.5
• 申請日: 2019-11-28
• 公開（公告）號: CN110895278B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 范運;邱笑違;黃莎;董颯英
• 申請（專利權）人: 北京樂普診斷科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N27/48
• 代理公司: 北京中創博騰知識產權代理事務所(普通合伙) 11636
• 代理人: 孫福嶺

1.基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)配制1.0～5.0mg/mL的氧化石墨烯的固體顆粒分散液和質量分數為0.25％～2％的殼聚糖溶液；所述殼聚糖溶液的溶劑為0.5％～8％的冰醋酸水溶液，水浴加熱至40℃，轉速2000r～5000r/min下溶解時間為4～6h；

(2)取所述固體顆粒分散液和所述殼聚糖溶液進行混合，混合液經超聲分散均勻形成滴涂液，所述滴涂液中的氧化石墨烯的固體顆粒分散液濃度為0.9～4.5mg/mL，滴涂液中的殼聚糖溶液的質量分數為0.23％～1.8％；

(3)將所述滴涂液超聲分散并取5～8μL滴涂液于金電極上，隔夜干燥；

(4)將滴涂有滴涂液的所述金電極放入20～40nm的膠體金溶液中并吸附至飽和，制得氧化石墨烯-殼聚糖/納米金修飾電極，氧化石墨烯-殼聚糖/納米金修飾電極記為GO-Chits/AuNPs修飾電極，隔夜干燥；

(5)配制pH為7.0～9.0的磷酸鹽緩沖溶液，用配置好的磷酸鹽緩沖溶液稀釋心肌標記物的包被抗體Ab1，稀釋后包被抗體Ab1濃度為0.2～1.0mg/ml；

(6)取5～8μL配置好的所述包被抗體Ab1滴涂于GO-Chits/AuNPs修飾電極表面上，孵育6～12h，制得GO-Chits/AuNPs/Ab1修飾電極；

(7)取所述磷酸鹽緩沖溶液配制質量分數為0.5％～5.0％的牛血清白蛋白BSA溶液，取配制好的所述牛血清白蛋白BSA溶液5～8μL滴涂于GO-Chits/AuNPs/Ab1修飾電極表面上，孵育6～12h，制得GO-Chits/AuNPs/Ab1/BSA修飾電極干燥儲存備用；

(8)在GO-Chits/AuNPs/Ab1/BSA修飾電極表面上滴涂5～8μL心肌標記物抗原Ag，孵育0.5～1h，制備成GO-Chits/AuNPs/Ab1/BSA/Ag修飾電極；

(9)取所述配置好的磷酸鹽緩沖溶液稀釋心肌標記物的酶標抗體Ab2，稀釋后酶標抗體Ab2濃度為0.1～0.3mg/ml；

(10)在GO-Chits/AuNPs/Ab1/BSA/Ag電極表面滴涂5～8μL對應的酶標抗體Ab2，孵育0.5～1h，構成心肌標記物免疫傳感器，心肌標記物免疫傳感器記為GO-Chits/AuNPs/Ab1/BSA/Ag/Ab2。

2.根據權利要求1所述的基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述氧化石墨烯的固體顆粒分散液溶劑為超純水或者乙醇。

3.根據權利要求1所述的基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟(9)中酶標抗體Ab2的酶為辣根過氧化物酶。

4.根據權利要求1所述的基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟(6)和步驟(7)中的孵育溫度為4℃，所述步驟(8)和步驟(10)中的孵育溫度為37℃，所述步驟(7)中GO-Chits/AuNPs/Ab1/BSA修飾電極的干燥儲存環境溫度為4℃。

5.根據權利要求1所述的基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述步驟(8)中心肌標記物抗原Ag為：NT-pro-BNP、BNP、cTnI、cTnT抗原。

6.一種基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學免疫傳感器，其特征在于，采用如權利要求1至5任一項所述的基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學免疫傳感器的制備方法獲得。

7.根據權利要求6所述的基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學免疫傳感器，其特征在于，用于心機標記物的檢測性能測試。