[發(fā)明專利]基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911187316.5
• 申請(qǐng)日: 2019-11-28
• 公開（公告）號(hào): CN110895278B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范運(yùn);邱笑違;黃莎;董颯英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京樂普診斷科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/53
• 分類號(hào): G01N33/53;G01N27/48
• 代理公司: 北京中創(chuàng)博騰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11636
• 代理人: 孫福嶺

基于氧化石墨烯?殼聚糖/納米金的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，主要解決電化學(xué)法檢測(cè)心肌標(biāo)記物測(cè)試問題，以氧化石墨烯?殼聚糖/納米金為基底，通過結(jié)和抗原和抗體，制備電化學(xué)免疫傳感器，通過結(jié)合標(biāo)記抗體上的辣根過氧化物酶對(duì)過氧化氫的電化學(xué)檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)不同濃度的抗原進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明可以快速，準(zhǔn)確的檢測(cè)不同濃度的心肌標(biāo)記物，制備的電化學(xué)免疫傳感器簡單有效，不僅有效實(shí)現(xiàn)了檢測(cè)不同濃度的心肌標(biāo)記物，而且由于基底材料簡單，為后續(xù)構(gòu)建其他標(biāo)記物電化學(xué)免疫傳感器研究提供了模型。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，特別涉及一種以氧化石墨烯-殼聚糖/納米金為基底接枝抗體的修飾電極的制備方法及應(yīng)用，屬于電化學(xué)傳感器領(lǐng)域。

背景技術(shù)

電化學(xué)免疫傳感器具有電化學(xué)生物傳感器的穩(wěn)定、高效、靈敏特點(diǎn)，同時(shí)又具有抗原抗體的高特異性結(jié)合的特點(diǎn)。電化學(xué)免疫傳感器相對(duì)于酶聯(lián)免疫、化學(xué)發(fā)光和熒光免疫分析法具有簡便、快速和成本低等特點(diǎn)。

構(gòu)建免疫傳感器的關(guān)鍵在于修飾材料基底固載抗體的量，傳統(tǒng)修飾電極的材料有殼聚糖等天然大分子和納米碳基材料，具有比表面積大、特定的官能團(tuán)多等特點(diǎn)，適用于固載抗體等蛋白質(zhì)，有利于構(gòu)建穩(wěn)定、高效、靈敏的電化學(xué)免疫傳感器。

急性心肌梗死是一種常見的心血管系統(tǒng)疾病，急性心肌梗死發(fā)病急促和病情發(fā)展迅速，有較高的臨床病死率。研究發(fā)現(xiàn)，心肌標(biāo)記物在急性心肌梗死臨床診斷中具有較高的特異性和靈敏度，在急性心肌梗死的早期診斷中具有極大的應(yīng)用價(jià)值。其中NT-pro?BNP和cTnI為心肌標(biāo)記物中常見的標(biāo)記物，NT－pro?BNP和cTnI已成為疾病早期診斷、監(jiān)測(cè)的常用指標(biāo)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，以氧化石墨烯-殼聚糖/納米金為基底，通過結(jié)和抗原和抗體，制備電化學(xué)免疫傳感器，通過結(jié)合酶標(biāo)記抗體上的酶對(duì)過氧化氫的電化學(xué)檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)對(duì)不同濃度的抗原進(jìn)行檢測(cè)。此外，通過對(duì)本電化學(xué)免疫傳感器的電化學(xué)性質(zhì)，以及對(duì)過氧化氫的催化性能的研究，能夠?yàn)楹罄m(xù)其他電化學(xué)免疫傳感器的構(gòu)筑奠定基礎(chǔ)。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：基于氧化石墨烯-殼聚糖/納米金的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，包括如下步驟：

(1)配制1.0～5.0mg/mL的氧化石墨烯的固體顆粒分散液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.25％～2％的殼聚糖溶液；

(2)取所述固體顆粒分散液和所述殼聚糖溶液進(jìn)行混合，混合液經(jīng)超聲分散均勻形成滴涂液，所述滴涂液中的氧化石墨烯的固體顆粒分散液濃度為0.9～4.5mg/mL，滴涂液中的殼聚糖溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.23％～1.8％；

(3)將所述滴涂液超聲分散并取5～8μL滴涂液于金電極上，隔夜干燥；

(4)將滴涂有滴涂液的所述金電極放入20～40nm的膠體金溶液中并吸附至飽和，制得氧化石墨烯-殼聚糖/納米金修飾電極，氧化石墨烯-殼聚糖/納米金修飾電極記為GO-Chits/AuNPs修飾電極，隔夜干燥；

(5)配制pH為7.0～9.0的磷酸鹽緩沖溶液，用配置好的磷酸鹽緩沖溶液稀釋心肌標(biāo)記物的包被抗體Ab1，稀釋后包被抗體Ab1濃度為0.2～1.0mg/ml；

(6)取5～8μL配置好的所述包被抗體Ab1滴涂于GO-Chits/AuNPs修飾電極表面上，孵育6～12h，制得GO-Chits/AuNPs/Ab1修飾電極；

(7)取所述磷酸鹽緩沖溶液配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％～5.0％的牛血清白蛋白BSA溶液，取配制好的所述牛血清白蛋白BSA溶液5～8μL滴涂于GO-Chits/AuNPs/Ab1修飾電極表面上，孵育6～12h，制得GO-Chits/AuNPs/Ab1/BSA修飾電極干燥儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?/p>