[發明專利]一種高產γ-氨基丁酸的乳桿菌及其分離培養方法和應用

在審

• 申請號: 201911184419.6
• 申請日: 2019-11-27
• 公開（公告）號: CN110747145A
• 公開（公告）日: 2020-02-04
• 發明（設計）人: 耿偉濤;王進;楊曼;王金菊;王艷萍
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;A23L2/38;A23L33/00;C12R1/25
• 代理公司: 11332 北京品源專利代理有限公司
• 代理人: 鞏克棟

1.一種高產γ-氨基丁酸的乳桿菌，其特征在于，所述高產γ-氨基丁酸的乳桿菌命名為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)D-9菌株，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏時間為2018年12月4日，保藏編號為CGMCC No.16864，地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

2.如權利要求1所述的高產γ-氨基丁酸的乳桿菌的分離培養方法，其特征在于，所述分離培養方法包括：

(1)從傳統發酵腌制品進行初步分離，篩選出能使溴甲酚紫-MRS平板變黃的菌落；

(2)挑取步驟(1)獲得的能使溴甲酚紫-MRS平板變黃的菌落，進行重復劃線培養，獲得純種菌落，并篩選出具有革蘭氏染色陽性和過氧化氫酶試驗陰性的菌株；

(3)將步驟(2)篩選出的菌株經過產γ-氨基丁酸的初篩和復篩，獲得所述高產γ-氨基丁酸的乳桿菌。

3.如權利要求2所述的高產γ-氨基丁酸的乳桿菌的分離培養方法，其特征在于，步驟(1)的操作具體包括：將傳統發酵腌制品用無菌生理鹽水稀釋后，涂布于溴甲酚紫-MRS培養基平板上，于35-40℃恒溫培養48-72h。

4.如權利要求2或3所述的高產γ-氨基丁酸的乳桿菌的分離培養方法，其特征在于，步驟(3)所述將篩選出的菌株經過產γ-氨基丁酸的初篩是指采用薄層層析法進行初篩；

優選地，步驟(3)所述將篩選出的菌株經過產γ-氨基丁酸的復篩是指采用高效液相色譜法進行復篩。

5.如權利要求1所述的高產γ-氨基丁酸的乳桿菌在制備紅薯發酵飲料中的應用。

6.一種紅薯發酵飲料的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：

(1)將紅薯與水混合后進行打漿，得到紅薯漿；

(2)將步驟(1)得到的紅薯漿與糖類物質混合；

(3)將步驟(2)得到的產物進行滅菌處理；

(4)將復合菌劑接種于步驟(3)得到的產物中，進行發酵，得到所述紅薯發酵飲料；所述復合菌劑為保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和如權利要求1所述高產γ-氨基丁酸的乳桿菌的組合。

7.如權利要求6所述的紅薯發酵飲料的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述紅薯與水的質量比為1:(1-3)，優選1:2；

優選地，步驟(2)所述糖類物質在紅薯漿中的質量體積百分含量為2-10％，優選4-8％；

優選地，步驟(2)所述糖類物質包括白砂糖。

8.如權利要求6或7所述的紅薯發酵飲料的制備方法，其特征在于，步驟(4)所述保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和如權利要求1所述高產γ-氨基丁酸的乳桿菌的質量比為1:(1-3):(1-3)，優選1:1:(1-3)，進一步優選為1:1:1；

優選地，步驟(4)所述復合菌劑的接種量為3×10⁶CFU/mL-3×10⁹CFU/mL；

優選地，步驟(4)所述發酵的時間為6-8h；

優選地，步驟(4)所述發酵的溫度為30-39℃。

9.如權利要求6-8中任一項所述的紅薯發酵飲料的制備方法，其特征在于，所述制備方法具體包括如下步驟：

(1)將新鮮的紅薯清洗、去皮、切塊，蒸制15-20min；

(2)將步驟(1)中蒸制后的紅薯與水以質量比為1:(1-5)進行混合后打漿，得到紅薯漿；

(3)將步驟(2)得到的紅薯漿與白砂糖混合，使白砂糖在紅薯漿中的質量體積百分含量為2-10％；

(4)將步驟(3)得到的產物在80-100℃的水浴鍋中滅菌10-15min；

(5)將保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌和如權利要求1所述高產γ-氨基丁酸的乳桿菌以質量比為1:(1-3):(1-3)接種于步驟(4)得到的產物中，接種量為3×10⁶CFU/mL-3×10⁹CFU/mL，在30-39℃下發酵6-8h，得到所述紅薯發酵飲料。

10.如權利要求6-9中任一項所述的制備方法制備得到的紅薯發酵飲料。