[發明專利]一種自體臍帶間充質干細胞凍存液及其制備和凍存方法

有效

• 申請號: 201911183500.2
• 申請日: 2019-11-27
• 公開（公告）號: CN110839614B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 紀慧嬌;肖占剛;趙曰水;鐘鮮梅;魯道源
• 申請（專利權）人: 西南醫科大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 李蕊

本發明公開了一種自體臍帶間充質干細胞凍存液及其制備和凍存方法，凍存液由配合使用的A液和B液組成，A液與B液的體積比為6?9:1?3；所述A液按照體積份數計，包括如下成分：65?75份含預添加物的基礎培養基；預添加物與基礎培養基的比為7?12mg：0.6?0.9mL；其中，預添加物按重量份數計，包括：4?6份巴戟天醇提取物、0.13?0.16份Ⅰ型膠原、0.05?0.15份透明質酸鈉和3?5份硫辛酸；所述B液按照體積份數計，包括如下成分：15?25份自體血清。使用本發明的凍存液能夠在新生兒分娩時同步獲得足量的血液用于分離自體血清，從而有效避免異種異體來源的血清蛋白污染，同時模擬細胞外基質微環境，提高細胞復蘇存活率，從而有利于其在生物樣本庫標準化操作和臨床細胞治療中的應用。

技術領域

本發明屬于細胞保存技術領域，具體涉及一種自體臍帶間充質干細胞凍存液及其制備和凍存方法。

背景技術

細胞凍存是將細胞放在低溫環境，減少細胞代謝，以便長期儲存的一種技術。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一，起到了細胞保種的作用。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。

細胞凍存時向培養基中加入保護劑，甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。加入血清和培養基，為細胞提供合適的滲透壓、pH值和滋養成分，但是不同來源的血清蛋白，包括異種或異體來源，提高了細胞污染幾率，且不符合臨床細胞治療制劑的安全標準。此外，間充質干細胞在凍存前被消化為懸浮單個細胞，脫離貼壁培養中胞外分泌形成的細胞基質，并且傳統凍存劑中不包含模擬胞外基質的成分，使得凍存復蘇后的細胞存活率較低。

細胞外基質的主要成分包括膠原、非膠原糖蛋白、彈性蛋白、氨基聚糖和蛋白聚糖。它可以影響細胞的存活、生長與死亡，決定細胞的形狀，控制細胞的分化，參與細胞的遷移。

生物樣本庫中的細胞凍存流程，以服務于臨床細胞治療為目的，對細胞的安全性、外源蛋白污染和細胞數量、存活率提出更高的要求，因而急需一種適用于自體臍帶間充質干細胞的凍存液，能夠在新生兒分娩的同時獲得足量的血液，提取自體血清，從而避免異種異體來源的血清蛋白污染，同時模擬細胞外基質微環境，提高冷凍復蘇后的細胞存活率。

發明內容

本發明的目的在于：針對上述現有技術中的不足，提供一種自體臍帶間充質干細胞凍存液及其制備和凍存方法，能夠有效避免異種異體來源的血清蛋白污染，模擬細胞外基質微環境，提高細胞復蘇存活率，從而有利于其在生物樣本庫標準化操作和臨床細胞治療中的應用。

本發明采用的技術方案如下：

一種自體臍帶間充質干細胞凍存液，凍存液由配合使用的A液和B液組成，A液與B液的體積比為6-9:1-3；

A液按照體積份數計，包括如下成分：65-75份含預添加物的基礎培養基；預添加物與基礎培養基的比為7-12mg：0.6-0.9mL；其中，預添加物按重量份數計，包括：4-6份巴戟天醇提取物、0.13-0.16份Ⅰ型膠原、0.05-0.15份透明質酸鈉和3-5份硫辛酸；

B液按照體積份數計，包括如下成分：15-25份自體血清。

進一步地，凍存液由配合使用的A液和B液組成，A液與B液的體積比為7:2；

A液按照體積份數計，包括如下成分：70份含預添加物的基礎培養基；預添加物與基礎培養基的比為9.25mg：0.7mL；其中，預添加物按重量份數計，包括：5份巴戟天醇提取物、0.15份Ⅰ型膠原、0.10份透明質酸鈉和4份硫辛酸；

B液按照體積份數計，包括如下成分：20份自體血清。