[發(fā)明專利]一種自體臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存液及其制備和凍存方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911183500.2
• 申請(qǐng)日: 2019-11-27
• 公開（公告）號(hào): CN110839614B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 紀(jì)慧嬌;肖占剛;趙曰水;鐘鮮梅;魯?shù)涝?/a>
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西南醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 成都正華專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51229
• 代理人: 李蕊

1.一種自體臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存液，其特征在于，所述凍存液由配合使用的A液和B液組成，A液與B液的體積比為6-9:1-3；

所述A液按照體積份數(shù)計(jì)，包括如下成分：65-75份含預(yù)添加物的基礎(chǔ)培養(yǎng)基；預(yù)添加物與基礎(chǔ)培養(yǎng)基的比為7-12mg：0.6-0.9mL；其中，預(yù)添加物按重量份數(shù)計(jì)，包括：4-6份巴戟天醇提取物、0.13-0.16份Ⅰ型膠原、0.05-0.15 份透明質(zhì)酸鈉和3-5份硫辛酸；

所述B液按照體積份數(shù)計(jì)，包括如下成分：15-25份自體血清；

所述自體血清的具體制備步驟如下：

(1)在供體新生兒娩出時(shí)，結(jié)扎臍帶近臍端，使臍動(dòng)脈血聚集，在臍帶靠近結(jié)扎端血管較為鼓起的部位刺入臍動(dòng)脈，抽取臍帶血，臍帶血中不加抗凝劑；

(2)于37℃下靜置血液凝固1-2h；

(3)將步驟（2）所得凝固血液放入4℃溫度下過夜，使得血塊固縮；

(4)當(dāng)步驟（3）中血清自然析出后，在 4℃，3000轉(zhuǎn)/分條件下，離心10分鐘，分離血清，棄去不溶物，即得；

所述巴戟天醇提取物由以下方式制得：將巴戟天粉碎至顆粒直徑為0.06-0.08mm，用95vt%的乙醇回流提取3次，每次1h，提取液減壓回收乙醇，制得混懸液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的自體臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存液，其特征在于，所述凍存液由配合使用的A液和B液組成，A液與B液的體積比為7:2；

所述A液按照體積份數(shù)計(jì)，包括如下成分：70份含預(yù)添加物的基礎(chǔ)培養(yǎng)基；預(yù)添加物與基礎(chǔ)培養(yǎng)基的比為9.25mg：0.7mL；其中，預(yù)添加物按重量份數(shù)計(jì)，包括：5份巴戟天醇提取物、0.15份Ⅰ型膠原、0.10 份透明質(zhì)酸鈉和4份硫辛酸；

所述B液按照體積份數(shù)計(jì)，包括如下成分：20份自體血清。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的自體臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存液，其特征在于：所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的自體臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將A液的各組分混合，制得A液，置于4℃中保存?zhèn)溆茫?/p>

制得B液置于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

5.采用權(quán)利要求1所述的自體臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存液進(jìn)行凍存的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）在37℃復(fù)蘇B液；

（2）將B液與A液按照1-3:6-9的體積比混合，得到混合液；

（3）獲得要凍存的細(xì)胞，按照1×10⁷cells/0.9mL- 1×10⁷cells/1mL的濃度，使用步驟（2）所得混合液重懸細(xì)胞，得到細(xì)胞懸液；

（4）按照二甲基亞砜與細(xì)胞懸液體積比為1-2:8-9，向細(xì)胞懸液中緩慢加入二甲基亞砜，混合均勻后，降溫凍存即可。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的自體臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存液進(jìn)行凍存的方法，其特征在于：所述步驟（2）中B液與A液按照2:7的體積比混合。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的自體臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存液進(jìn)行凍存的方法，其特征在于：所述步驟（3）中濃度為1×10⁷cells/0.9mL。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的自體臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存液進(jìn)行凍存的方法，其特征在于：所述步驟（4）中二甲基亞砜與細(xì)胞懸液體積比為1:9。