[發明專利]一種巰基化透明質酸及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201911181698.0
• 申請日: 2019-11-27
• 公開（公告）號: CN112842929A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 魏健;李霞;郭學平;王成山;欒貽宏;石艷麗;耿鳳;劉愛華
• 申請（專利權）人: 華熙生物科技股份有限公司;山東華熙海御生物醫藥有限公司
• 主分類號: A61K8/73
• 分類號: A61K8/73;A61Q19/00;A61L27/20;A61L27/52;C12N5/00
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 賈波

1.一種巰基化透明質酸，其特征是：其是將透明質酸或其鹽的部分羥基替換為含有巰基的酯基而得；優選的，巰基的取代度為10%-40%，所述巰基的取代度指的是巰基摩爾數與透明質酸雙糖單元摩爾數的比值。

2.根據權利要求1所述的巰基化透明質酸，其特征是：所述含有巰基的酯基的結構式為，M為C1-C6的亞烷基，優選的，所述含有巰基的酯基為、或；優選的，所述巰基化透明質酸是將平均分子量為200 ~2000 kDa的透明質酸或其鹽的部分羥基替換為含有巰基的酯基而得；優選的，每個重復單元最多只有一個羥基被取代，被取代的羥基位于N-乙酰葡糖胺上。

3.一種巰基化透明質酸的制備方法，其特征是：包括a）將透明質酸或其鹽中的羥基與含羧基的二硫化合物中的羧基進行酯化反應，以及b）將連接到透明質酸或其鹽上的二硫鍵還原為巰基的步驟；優選的，在透明質酸或其鹽與含羧基的二硫化合物反應前，還包括將透明質酸或其鹽與四丁基氫氧化銨反應形成透明質酸四丁基銨鹽的步驟，然后將透明質酸四丁基銨鹽與含羧基的二硫化合物進行反應。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征是：透明質酸或其鹽的平均分子量為200 ~2000 kDa；優選的，所述含羧基的二硫化合物為3,3’-二硫代二丙酸、2,2’-二硫代二乙酸或4,4’-二硫代二丁酸。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征是：透明質酸或其鹽與四丁基氫氧化銨反應的步驟為：將透明質酸或其鹽懸浮于有機溶劑水溶液中，加酸調整pH至酸性，使透明質酸或其鹽轉化為酸型透明質酸，過濾，將濾餅用水溶解，然后加入四丁基氫氧化銨進行反應，反應后冷凍干燥，得透明質酸四丁基銨鹽。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征是：透明質酸或其鹽與四丁基氫氧化銨反應時，加酸至pH≤4，優選pH為2-4；

優選的，透明質酸或其鹽與四丁基氫氧化銨反應時，所述有機溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇和丙酮中的一種或多種，有機溶劑水溶液的濃度為60-90wt%；

優選的，透明質酸或其鹽與四丁基氫氧化銨反應時，透明質酸或其鹽與有機溶劑水溶液的用量關系為1g:10~50mL；

優選的，透明質酸或其鹽與四丁基氫氧化銨反應時，加入四丁基氫氧化銨至溶液pH為6.5~8.0。

7.根據權利要求3所述的制備方法，其特征是：透明質酸或其鹽或者透明質酸四丁基銨鹽與含羧基的二硫化合物的酯化反應在催化劑存在下進行，所述催化劑為二碳酸二叔丁酯和成分A的混合物，所述成分A為4-二甲氨基吡啶、四甲基乙二胺或N,N’-羰基二咪唑，優選的，成分A與二碳酸二叔丁酯比值為0.15~1.5g:1mL；

優選的，透明質酸或其鹽或者透明質酸四丁基銨鹽與含羧基的二硫化合物的酯化反應在非質子溶劑存在下進行，更優選的，所述非質子溶劑為二甲基亞砜或N,N-二甲基甲酰胺；

優選的，透明質酸或其鹽或者透明質酸四丁基銨鹽與含羧基的二硫化合物的質量比為1:1.6~5.0；

優選的，透明質酸或其鹽或者透明質酸四丁基銨鹽在非質子溶劑中的濃度為0.5~2.0wt%；

優選的，催化劑與透明質酸或其鹽或透明質酸四丁基銨鹽的質量比為0.5～1.5:1；

優選的，酯化反應的溫度為40-50℃。

8.根據權利要求3所述的制備方法，其特征是：連接到透明質酸或其鹽上的二硫鍵在還原劑存在下還原為巰基；

優選的，所述還原劑為二硫代蘇糖醇、三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽、還原型谷胱甘肽和2-巰基乙醇中的一種或多種；

優選的，還原反應的反應體系的pH為7.0-9.0；

優選的，還原劑與透明質酸或其鹽或者透明質酸四丁基銨鹽的摩爾比為1.2～2.5:1，透明質酸或其鹽或者透明質酸四丁基銨鹽的摩爾數以透明質酸雙糖單元的摩爾數計；

優選的，還原反應在水中進行，水的用量為透明質酸或其鹽的二硫化合物的質量的50~70倍。