[發明專利]一種高純度孕馬血清促性腺激素的制備工藝

有效

• 申請號: 201911181569.1
• 申請日: 2019-11-27
• 公開（公告）號: CN110950948B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 俞通泰;于鋼;沙樂;王榮慶
• 申請（專利權）人: 寧波三生生物科技股份有限公司;甘肅天祁生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/59
• 分類號: C07K14/59;C07K1/30
• 代理公司: 寧波市鄞州盛飛專利代理事務所(特殊普通合伙) 33243
• 代理人: 王玲華;洪珊珊

一種高純度孕馬血清促性腺激素的制備工藝，包括以下步驟：(1)調節孕馬血漿的pH至3.0?4.0，固液分離，濾液濃縮，加入醇類物質使得溶液體系的醇類物質濃度為30?55％(v/v)，再固液分離后，濾液加入醇類物質使得溶液體系的醇類物質濃度為70?90％(v/v)，獲得的沉淀干燥，即為PMSG粗品；(2)往PMSG粗品中加入甲苯衍生物或乙苯衍生物溶液，固液分離后，沉淀物加醇類物質，獲得的沉淀干燥，即為PMSG中間品；(3)PMSG中間品加入銨鹽和/或鈣鹽和/或鉀鹽溶液和醇類物質，固液分離后，清液二次加入銨鹽和/或鈣鹽和/或鉀鹽溶液和醇類物質，固液分離后，清液加入醇類物質，獲得沉淀干燥，得PMSG精制品。

技術領域

本發明屬于孕馬血清促性腺激素生產技術領域，具體涉及一種高純度孕馬血清促性腺激素的制備工藝。

背景技術

孕馬血清促性腺激素(簡稱PMSG)是孕中母馬尿囊絨毛膜細胞分泌的糖蛋白類促性腺激素。PMSG具有類似促卵泡素(FSH)和促黃體素(LH)的雙重活性，但以FSH的作用為主，具有明顯的促卵泡發育作用；同時，也有一定的促排卵和黃體形成的功能，對雄性動物具有促使精細管發育和性細胞分化的功能。實踐上，PMSG可以調控母畜同期發情，實現可控同步批次化生產，并縮短配種時間、降低不孕概率、提高繁殖效率。目前，PMSG已經廣泛應用于動物的誘導發情、同期發情，超數排卵或增加排卵率；同時對卵巢發育不全或雄性生精能力衰退等也有良好的療效。

應用范圍的擴大和規模化養殖的普及導致市場對PMSG的需求量大幅上升。盡管國際和國內市場需求很大，但我國的PMSG生產工藝還很落后，基本上沿用傳統的蛋白質分離技術，如蒙馬(天津)生物科技有限公司申請的專利《一種孕馬血清促性腺激素的提取分離系統》(CN207294655U)公開的提取方法大致為：孕馬血清偏磷酸沉淀-加入硫酸銨-低濃度乙醇沉淀-高濃度乙醇沉淀-獲得PMSG粗品，以及中國人民解放軍軍事醫學科學院軍事獸醫研究所申請的專利《獸用血促性素生產工藝及產品》(CN1872088B)公開的提取方法為：孕馬血清稀釋-加硫酸銨并調pH6.0-7.0-過濾后加偏磷酸沉淀-上清中空纖維濃縮-低濃度乙醇沉淀-上清高濃度乙醇沉淀-獲得PMSG粗品。上述傳統方法獲得的產物均為PMSG粗品，效價較低，不足300IU/mg，國家藥典標準≥100IU/mg，而歐洲藥典標準為≥1000IU/mg，PMSG粗品的效價與歐洲藥典標準相差甚遠。純度低的PMSG制品對受用動物也會產生一定危害，除此之外，上述提取方法還要存在生產過程回收率低、質量穩定性差，規模化生產技術就更不盡人如意，無法滿足要求，也嚴重影響到經濟效益和社會效益的實現。

發明內容

本發明針對現有技術中PMSG制備過程中存在效價低、質量差的缺陷，提供一種PMSG的制備工藝，獲得效價≥1500IU/mg的高純度PMSG。

本發明的以上目的通過以下技術方案來實現：

一種高純度孕馬血清促性腺激素的制備工藝，其特征在于，所述制備工藝包括以下步驟：

(1)孕馬血清促性腺激素粗品制備：調節孕馬血漿的pH至3.0-4.0，固液分離，濾液濃縮后，加入醇類物質使得溶液體系的醇類物質濃度為30-55％(v/v)，再固液分離后，濾液加入醇類物質使得溶液體系的醇類物質濃度為70-90％(v/v)，固液分離后，沉淀干燥，即為孕馬血清促性腺激素粗品；

(2)孕馬血清促性腺激素中間品制備：往孕馬血清促性腺激素粗品中加入甲苯衍生物或乙苯衍生物溶液，固液分離后，沉淀物加醇類物質，固液分離后，沉淀干燥，即為孕馬血清促性腺激素中間品；

(3)孕馬血清促性腺激素精制品制備：孕馬血清促性腺激素中間品加入銨鹽和/或鈣鹽和/或鉀鹽溶液和醇類物質，固液分離后，清液二次加入銨鹽和/或鈣鹽和/或鉀鹽溶液和醇類物質，固液分離后，清液加入醇類物質，獲得的沉淀干燥，得孕馬血清促性腺激素精制品。