[發明專利]食源性小腸結腸炎耶爾森菌的LAMP檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201911180875.3
• 申請日: 2019-11-27
• 公開（公告）號: CN110734992A
• 公開（公告）日: 2020-01-31
• 發明（設計）人: 胡青海;王西;胡仲浩;譚攀攀;杜曉莉;徐欣欣;王權;劉光清
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所(中國動物衛生與流行病學中心上海分中心)
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 31276 上海序倫律師事務所
• 代理人: 周東萍

本發明公開了一種食源性小腸結腸炎耶爾森菌的LAMP檢測試劑盒，該試劑盒包含特異性針對食源性小腸結腸炎耶爾森菌ail基因設計的引物，所述引物包括SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3、以及SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5。本發明還公開了上述LAMP檢測試劑盒的應用，用于對食品進行食源性小腸結腸炎耶爾森菌的檢測。本發明食源性小腸結腸炎耶爾森菌的LAMP檢測試劑盒，檢測靈敏度可達2.8×10²CFU/mL，比普通PCR高1000倍，而且還具有特異性好、結果可視等優點，適用于食品安全監測現場基層實時、快速、準確地檢測小腸結腸炎耶爾森菌。

技術領域

本發明涉及生物監測技術領域，尤其涉及一種食源性小腸結腸炎耶爾森菌的LAMP檢測試劑盒及其應用。

背景技術

小腸結腸炎耶爾森菌，是一種革蘭氏陰性桿菌，存在于各種環境中。作為一種食源性的致病菌，小腸結腸炎耶爾森菌的宿主廣泛，可通過污染的食物和水源傳播，能致人和其他多種動物發生胃腸炎、關節炎、敗血癥及結節性紅斑等病。耶爾森菌是導致小腸結腸炎的主要因素，且傳染能力強，人畜之間均可傳播，是一種非常重要的人畜共患病病原。目前，小腸結腸炎耶爾森菌的檢驗方法主要基于傳統的生理生化方法檢測，其檢測周期長，耗費大量的人力和物力，且整體檢驗結果會受到環境等其他因素的影響，從而導致整體檢驗結果并不精準。環介導等溫核酸擴增(Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP)是一種新型核酸快速等溫擴增技術，可在等溫條件下快速、高效、高特異性地擴增序列，具有檢測速度快、成本低等特點。

發明內容

本發明要解決目前缺乏快速準確檢測小腸結腸炎耶爾森菌的試劑盒的技術問題，提供一種食源性小腸結腸炎耶爾森菌的LAMP檢測試劑盒，該試劑盒不僅操作簡單、檢測速度快、現場可視，而且靈敏性高、特異性強，適用于食源性小腸結腸炎耶爾森菌的快速精準檢測。

為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現:

在本發明的一個方面，提供了一種食源性小腸結腸炎耶爾森菌的LAMP檢測試劑盒，所述試劑盒包含特異性針對食源性小腸結腸炎耶爾森菌ail基因設計的引物，所述引物包括SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3、以及SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5。

優選的，所述試劑盒還包含10×ThermoPol反應緩沖液、dNTP混合液、MgSO₄溶液、DNA聚合酶。

優選的，所述試劑盒還包含顯色試劑如SYBR Green I。

本發明中，所述試劑盒采用等溫擴增進行檢測反應，等溫擴增的步驟包括：60℃～70℃恒溫孵育50～70分鐘，80℃～90℃滅活3～8分鐘。

在本發明的另一方面，提供了一種用于食源性小腸結腸炎耶爾森菌LAMP檢測的引物，其特異性擴增食源性小腸結腸炎耶爾森菌ail基因，所述引物包括SEQ ID NO.2和SEQID NO.3、以及SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5。

在本發明的另一方面，還提供了上述LAMP檢測試劑盒的用途，用于對食品進行食源性小腸結腸炎耶爾森菌的檢測。

采用本發明的試劑盒，可以在基層現場實時、快速、準確地檢測食品中是否含有小腸結腸炎耶爾森菌，方便快捷地實現食品的安全監測。

在本發明的另一方面，還提供了上述LAMP檢測試劑盒的用途，用于實驗室對食源性小腸結腸炎耶爾森菌進行鑒定。

在本發明的另一方面，還提供了一種對食品進行食源性小腸結腸炎耶爾森菌檢測的方法，包括以下步驟：

食品的采樣和增菌培養；

增菌樣品DNA提取；

采用上述LAMP檢測試劑盒對樣品DNA進行檢測；