[發明專利]擬南芥突變體的原生質體在分析信號轉導途徑中的應用

有效

• 申請號: 201911178502.2
• 申請日: 2019-11-27
• 公開（公告）號: CN110878323B
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發明（設計）人: 李寧;黃黎君;繆文卓;江文翰;彭明博;萬文凱
• 申請（專利權）人: 中南林業科技大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/66
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 閆書寧

1.一種分析激素信號轉導途徑中COI1蛋白能否降解目的蛋白的方法，為采用擬南芥突變體coi1突變體的原生質體分析激素信號轉導途徑中COI1蛋白能否降解目的蛋白，具體步驟如下：

(1)構建蛋白融合報告基因表達載體、效應載體和內部對照載體；

蛋白融合報告基因表達載體中含有表達盒甲，表達盒甲從5’至3’依次包括啟動子甲、編碼蛋白標簽甲的核苷酸序列、目的蛋白的編碼基因和螢火蟲熒光素酶的編碼基因；蛋白融合報告基因表達載體表達含有蛋白標簽甲的融合蛋白；融合蛋白由目的蛋白和螢火蟲熒光素酶組成；

效應載體中含有表達盒乙，表達盒乙從5’至3’依次包括啟動子乙、編碼蛋白標簽乙的核苷酸序列和COI1蛋白的編碼基因；效應載體表達含有蛋白標簽乙的COI1蛋白；

內部對照載體中含有表達盒丙，表達盒丙從5’至3’依次包括啟動子丙和海腎熒光素酶的編碼基因；內部對照載體表達海腎熒光素酶；

(2)完成步驟(1)后，將蛋白融合報告基因表達載體、效應載體和內部對照載體在擬南芥突變體coi1突變體的原生質體中瞬時表達，之后測定熒光素酶活性并進行如下判斷：如果熒光素酶活性降低，則COI1蛋白可以降解目的蛋白；否則COI1蛋白不可以降解目的蛋白。

2.如權利要求1所述方法，其特征在于：

所述啟動子甲、所述啟動子乙或所述啟動子丙為UBQ10啟動子；

所述蛋白標簽甲或所述蛋白標簽乙為HA蛋白標簽。

3.一種用于分析激素信號轉導途徑中COI1蛋白能否降解目的蛋白的試劑盒，由擬南芥突變體coi1突變體的原生質體、權利要求1中所述蛋白融合報告基因表達載體、所述效應載體和所述內部對照載體組成。

4.轉染了權利要求1中所述蛋白融合報告基因表達載體、所述效應載體和所述內部對照載體的擬南芥突變體coi1突變體的原生質體。

5.擬南芥突變體coi1突變體的原生質體在分析激素信號轉導途徑中COI1蛋白能否降解目的蛋白中的應用。

6.權利要求3所述試劑盒在分析激素信號轉導途徑中COI1蛋白能否降解目的蛋白中的應用。

7.轉染了權利要求1中所述蛋白融合報告基因表達載體、所述效應載體和所述內部對照載體的擬南芥突變體coi1突變體的原生質體在分析激素信號轉導途徑中COI1蛋白能否降解目的蛋白中的應用。