[發明專利]一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法

在審

• 申請號: 201911166140.5
• 申請日: 2019-11-25
• 公開（公告）號: CN110777117A
• 公開（公告）日: 2020-02-11
• 發明（設計）人: 呂楊帆;曹亞;常獻
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍陸軍軍醫大學第二附屬醫院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 50244 重慶項乾光宇專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 侯玉花

本發明公開了一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法，包括以下操作步驟：將骨肉瘤干細胞放入至選定的培養基內；對培養收獲的骨肉瘤干細胞及培養基進行離心；對獲得的骨肉瘤干細胞培養基上清進行低溫攪拌，并放入至試管內進行沉淀，沉淀結束后對沉淀產生的上清液進行收集；對收集到的上清液使用細胞濾膜進行過濾，并獲得過濾后的濾固體；用磷酸鹽緩沖液將所述濾固體進行重懸；將獲得的重懸液放入至超速離心機內進行低溫超速離心，并獲得離心液；對離心液進行沉淀，此時所獲得的沉淀體即為骨肉瘤干細胞外泌體。本發明在運用的過程中，能提高骨肉瘤干細胞外泌體的提取效率，且確保了提取后的外泌體的質量，有利于進行推廣應用。

技術領域

本發明涉及骨肉瘤干細胞技術領域，尤其涉及一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法。

背景技術

骨肉瘤干細胞是骨肉瘤啟動、發展、轉移、復發的根源，且越來越被人關注，已成為腫瘤發生、發展機制研究中的熱點，在對骨肉瘤干細胞進行研究的過程中，涉及到骨肉瘤干細胞外泌體的提取，傳統用于常規細胞提取外泌體的方法在運用至骨肉瘤干細胞外泌體的提取過程中時，存在著提取效率較低，提取效果較差，且存在提取步驟繁瑣、限制條件較多的缺點。為此，我們提出了一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術中存在的缺點，而提出的一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法。

為了實現上述目的，本發明采用了如下技術方案：

一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法，包括以下操作步驟：

S1：獲取骨肉瘤干細胞，將骨肉瘤干細胞放入至選定的培養基內，培養24-48小時后進行收獲；

S2：對培養收獲的骨肉瘤干細胞及培養基進行離心，獲得骨肉瘤干細胞培養基上清；

S3：對步驟S2獲得的骨肉瘤干細胞培養基上清進行20-30分鐘的低溫攪拌，并進一步放入至試管內進行沉淀，沉淀結束后對沉淀產生的上清液進行收集；

S4：對步驟S3收集到的上清液使用規格為0.20um的細胞濾膜進行過濾，并獲得過濾后的濾固體；

S5：用磷酸鹽緩沖液將所述濾固體進行重懸，得到重懸液；

S6：將步驟S5獲得的重懸液放入至超速離心機內進行低溫超速離心，并獲得離心液；

S7：對步驟S6的離心液進行沉淀，并在沉淀后吸除上清液并保留沉淀體，此時所獲得的沉淀體即為骨肉瘤干細胞外泌體。

優選的，步驟S3在進行的過程中，溫度控制在2-4攝氏度，攪拌的速度控制在100-200r/min。

優選的，在步驟S5進行的過程中，磷酸鹽緩沖液的PH值為7-8。

優選的，在步驟S6進行的過程中，低溫為2-3攝氏度，離心過程中的離心力為1200-1500xg，離心時間持續50-60分鐘。

優選的，針對步驟S7獲得的骨肉瘤干細胞外泌體，使其放置在-70攝氏度的冰箱內進行存儲。

本發明提出的一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法，有益效果在于：本方案在進行的過程中，步驟簡易且便于進行操作，通過對骨肉瘤干細胞進行培養再進行外泌體的提取，進而提高了骨肉瘤干細胞外泌體的提取效率，且確保了提取后的外泌體的質量，因此本方法有利于進行推廣應用。

具體實施方式

下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬于本發明保護的范圍。

實施例1