[發明專利]一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法在審
| 申請號： | 201911166140.5 | 申請日： | 2019-11-25 |
| 公開（公告）號： | CN110777117A | 公開（公告）日： | 2020-02-11 |
| 發明（設計）人： | 呂楊帆;曹亞;常獻 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍陸軍軍醫大學第二附屬醫院 |
| 主分類號： | C12N5/09 | 分類號： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 50244 重慶項乾光宇專利代理事務所(普通合伙) | 代理人： | 侯玉花 |
| 地址： | 400037 重*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 骨肉瘤 干細胞 沉淀 放入 培養基 離心液 上清液 過濾 干細胞培養基 磷酸鹽緩沖液 超速離心機 超速離心 沉淀產生 低溫攪拌 提取分離 提取效率 細胞濾膜 重懸液 試管 重懸 收獲 | ||
1.一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法，其特征在于，包括以下操作步驟：
S1：獲取骨肉瘤干細胞，將骨肉瘤干細胞放入至選定的培養基內，培養24-48小時后進行收獲；
S2：對培養收獲的骨肉瘤干細胞及培養基進行離心，獲得骨肉瘤干細胞培養基上清；
S3：對步驟S2獲得的骨肉瘤干細胞培養基上清進行20-30分鐘的低溫攪拌，并進一步放入至試管內進行沉淀，沉淀結束后對沉淀產生的上清液進行收集；
S4：對步驟S3收集到的上清液使用規格為0.20um的細胞濾膜進行過濾，并獲得過濾后的濾固體；
S5：用磷酸鹽緩沖液將所述濾固體進行重懸，得到重懸液；
S6：將步驟S5獲得的重懸液放入至超速離心機內進行低溫超速離心，并獲得離心液；
S7：對步驟S6的離心液進行沉淀，并在沉淀后吸除上清液并保留沉淀體，此時所獲得的沉淀體即為骨肉瘤干細胞外泌體。
2.根據權利要求1所述的一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法，其特征在于，步驟S3在進行的過程中，溫度控制在2-4攝氏度，攪拌的速度控制在100-200r/min。
3.根據權利要求1所述的一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法，其特征在于，在步驟S5進行的過程中，磷酸鹽緩沖液的PH值為7-8。
4.根據權利要求1所述的一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法，其特征在于，在步驟S6進行的過程中，低溫為2-3攝氏度，離心過程中的離心力為1200-1500xg，離心時間持續50-60分鐘。
5.根據權利要求1所述的一種骨肉瘤干細胞外泌體提取分離的方法，其特征在于，針對步驟S7獲得的骨肉瘤干細胞外泌體，使其放置在-70攝氏度的冰箱內進行存儲。
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