[發明專利]一種高密度酵母發酵液的制備方法

有效

• 申請號: 201911155830.0
• 申請日: 2019-11-22
• 公開（公告）號: CN110684680B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 符秀迪;程勐萬里;孟龍;薛芹
• 申請（專利權）人: 安徽五糧泰生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16
• 代理公司: 合肥云道爾知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 34230
• 代理人: 閆興貴

1.一種高密度酵母發酵液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

①、稀復合營養液和濃縮復合營養液的制備：

將玉米、豆粕粉碎，加水調漿后，依次加入高溫淀粉酶、糖化酶、蛋白酶，控溫酶解，徹底酶解后制得液體酶解液；將液體酶解液固液分離制得固形物濕渣和稀復合營養液；

將一部分稀復合營養液留作發酵底糖使用，剩余稀復合營養液經過減壓蒸發濃縮后制得濃縮復合營養液；

其中，玉米和豆粕的質量比為1:0.01～0.2；加水調漿干物濃度為10～40%；高溫淀粉酶的添加量為每噸玉米豆粕混合物加0.1～1kg，控制漿液pH 5.5～6.5，酶解時間0.5～2h；

糖化酶的添加量為每噸玉米豆粕混合物加0.1～0.5kg，控制漿液pH 4.5～5.5酶解時間0.5～20h；

蛋白酶的添加量為每噸玉米豆粕混合物加0.1～1kg，控制漿液pH 4.5～5.5，酶解時間0.5～20h；

稀復合營養液濃縮后的干物濃度為40～65%；

②、高密度酵母菌液的制備：

在全自動發酵罐中，將一部分稀復合營養液稀釋后經高溫滅菌冷卻后，接入酵母菌種子液，所述的酵母菌種子液為釀酒酵母，通入足量的無菌空氣進行培養，控制溶氧不低于20%，當溶氧突然升至60％以上時，通過蠕動泵流加無菌濃縮復合營養液和磷酸氫二銨溶液控制充足的溶氧，濃縮復合營養液和磷酸氫二銨的流加質量比1:0.004，控制pH 4.0～4.5，當酵母密度為最大時，停止流加，待溶氧回升至70％，停止通風和攪拌；

發酵罐保持正壓，將酵母發酵液靜置，完全沉降后，從罐底將沉淀的酵母放出，即獲得高密度的酵母菌液；將發酵罐中剩余的發酵液，繼續通過分別流加濃縮復合營養液和磷酸氫二銨溶液的方式控制充足的溶解氧，待酵母再次富集培養至最大密度后，停止流加，待溶氧回升至70％，停止通風和攪拌；靜置，放出高密度酵母菌液，如此連續循環生產多次，收集所有高密度酵母菌液即可；

其中，控制充足的溶氧方式為：控制溶氧20％～40％，攪拌轉速提高至150r/min；

其中，稀復合營養液稀釋至干物濃度為0.01～5%；磷酸氫二銨溶液中磷酸氫二銨和水的質量比為10～50：50～90；濃縮復合營養液和磷酸氫二銨溶液的流加質量比為1:0.001～0.1；酵母菌種子液的接種質量比為0.2～20%；

制備酵母發酵液時：發酵溫度：20～40 ℃；發酵pH ：4.0～6.0；有氧發酵攪拌轉速20～1000r/min；通氣比1:0.5～3v/v；溶解氧濃度為10～100%；發酵周期：12～72h，酵母發酵終點菌數為0.5～1.20×10⁹ cfu/ml；

酵母培養結束標志為：發酵液中發酵性糖含量為0～0.1%，溶解氧含量為60～100%；靜置沉降時間為1～20h。

2.根據權利要求1所述的一種高密度酵母發酵液的制備方法，其特征在于：所述的酵母菌種子液為釀酒酵母CICC32280。

3.根據權利要求1所述的一種高密度酵母發酵液的制備方法，其特征在于，步驟①中反應條件如下：

玉米和豆粕的質量比為1:0.05～0.1；加水調漿干物濃度為25～30%；高溫淀粉酶的添加量為每噸玉米豆粕混合物加0.3～0.5kg，控制漿液pH 5.8～6.2，酶解時間0.5～1h；

糖化酶的添加量為每噸玉米豆粕混合物加0.4～0.5kg控制漿液pH 4.8～5.2酶解時間5～10h；

蛋白酶的添加量為每噸玉米豆粕混合物加0.5～0.6kg控制漿液pH 4.5～5.5，酶解時間15～20h；

稀復合營養液濃縮后的干物濃度為40～45%。