[發明專利]檢測EZH2的R342位點非對稱性二甲基化修飾的抗體

在審

• 申請號: 201911150672.X
• 申請日: 2019-11-21
• 公開（公告）號: CN110687304A
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發明（設計）人: 李中偉;白津;鄭駿年;王典典;侯平甫;李敏樂;柴大飛
• 申請（專利權）人: 徐州醫科大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 32321 南京業騰知識產權代理事務所(特殊普通合伙)
• 代理人: 李靜

1.一種檢測EZH2的R342位點非對稱性二甲基化修飾的抗體，其特征在于，所述抗體的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.如權利要求1所述檢測EZH2的R342位點非對稱性二甲基化修飾的抗體，其特征在于，所述抗體為多克隆抗體。

3.權利要求1或2所述抗體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)采用多肽合成技術，合成氨基酸序列如SEQ ID No.1所示抗體的多肽，然后與血藍蛋白KLH交聯，得到抗原；

(2)將抗原與完全佐劑或者不完全佐劑混合后注入動物體內進行免疫，免疫8次后，取動物全血，進行純化，得到抗體。

4.如權利要求3所述抗體的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，抗原與完全佐劑或者不完全佐劑的體積比為1:1。

5.如權利要求3所述抗體的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述動物為新西蘭大白兔，所述免疫的方法：對新西蘭大白兔進行陰性血采集及第一次免疫(0天)；第二周進行第二次免疫；第四周進行第三次免疫；第五周進行第四次免疫；第六周進行第五次免疫；第七周進行第六次免疫；第八周進行第七次免疫；第九周進行第八次免疫；最后在第十周取動物全血；第一次和第二次免疫，抗原的體積為0.5mL,抗原的質量為0.25mg；第三次到第八次免疫，抗原的體積為0.3mL,抗原的質量為0.15mg。

6.如權利要求3或4或5所述抗體的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述純化的方法，包括如下步驟：

1)取抗原親和層析柱，用緩沖液TE buffer平衡柱床；

2)將需純化抗體按1-2ml/min的速度上樣于相應的層析柱，反復上樣4-5遍使能與多肽發生特異性結合的抗體吸附在柱床上；

3)上樣完畢，用緩沖液TE buffer平衡柱床；

4)用洗脫液glycine buffer以1-2ml/min的速度洗脫結合在柱床上的抗體；

5)樣品收集完畢，用緩沖液TE buffer平衡柱床；

6)用洗脫液glycine buffer清洗柱床；

7)再次用TE buffer平衡柱床，置于4℃保存；

8)將洗脫得到的抗體用PBS buffer透析48h后，即得純化后的抗體。