[發(fā)明專利]一種間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)效力的檢測方法

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• 申請日: 2019-11-21
• 公開（公告）號: CN110938668A
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉廣洋;劉擁軍;張晨亮;李欣;米一;苗麗;馬靜
• 申請（專利權(quán)）人: 北京貝來生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/071;A61K35/28;A61P37/02
• 代理公司: 北京華夏正合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

1.一種間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)效力的檢測方法，其特征在于，所述方法包括檢測間充質(zhì)干細(xì)胞分泌可溶性TNFRI的水平，從而判定間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)效力，優(yōu)選地，所述生物學(xué)效力為免疫抑制能力。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述間充質(zhì)干細(xì)胞為骨髓組織、脂肪組織、臍帶組織或胎盤組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞；優(yōu)選地，所述間充質(zhì)干細(xì)胞為人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述檢測方法，其特征在于，所述方法包括檢測所述間充質(zhì)干細(xì)胞在體外例如在細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分泌的可溶性TNFRI；優(yōu)選地，通過ELISA方法檢測不同批次臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)上清液中TNFRI的含量。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述檢測方法，其特征在于，所述間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫抑制能力與可溶性TNFRI水平正相關(guān)；優(yōu)選地，所述檢測方法的判斷標(biāo)準(zhǔn)為：每1x10⁶個間充質(zhì)干細(xì)胞在48小時內(nèi)表達(dá)可溶性TNFRI的水平為215pg以上，低于此標(biāo)準(zhǔn)則判定為間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)效力不合格；更優(yōu)選地，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)48小時后，所述間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)可溶性TNFRI的水平為215pg/10⁶細(xì)胞以上時，判定其免疫抑制能力大于70％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述檢測方法，其特征在于，在細(xì)胞種子庫、工作庫及注射液的檢測及其質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn)的制定方面的應(yīng)用。

6.檢測可溶性TNFRI水平的試劑在制備檢測間充質(zhì)干細(xì)胞免疫效力的試劑盒的應(yīng)用；優(yōu)選地，該檢測采用的判斷標(biāo)準(zhǔn)為：1x10⁶個間充質(zhì)干細(xì)胞在48小時內(nèi)表達(dá)可溶性TNFRI的水平為215pg以上，低于此標(biāo)準(zhǔn)則判定為間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)效力不合格。

7.一種對間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)效力進(jìn)行量化的方法，其特征在于，包括：

確定所述間充質(zhì)干細(xì)胞在體外如細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的TNFRI分泌量；以及基于公式y(tǒng)＝(a+bx)×100％，以便確定所述間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)效力，優(yōu)選地，所述生物學(xué)效力為免疫抑制能力，

其中，

y為TNF-α抑制率(％)，x為TNFRI分泌量(pg/10⁶細(xì)胞)，

a為0.5～0.6之間的常數(shù)，優(yōu)選為0.55465，

b為0.0006～0.0007之間的常數(shù)，優(yōu)選為0.00068。

8.一種確定間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)工藝的方法，其特征在于，包括：

(1)采用候選工藝，從組織中分離、培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞；

(2)利用權(quán)利要求7所述的方法對所述間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)效力進(jìn)行量化，得到量化結(jié)果；以及

(3)基于所述量化結(jié)果，確定最終間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)工藝參數(shù)；

優(yōu)選地，在步驟(3)中，當(dāng)所述間充質(zhì)干細(xì)胞對PBMC分泌的TNF-α抑制率大于等于70％時，則選擇所述候選工藝為最終生產(chǎn)工藝；更優(yōu)選地，當(dāng)所述TNF-α抑制率小于70％時，則對所述候選工藝進(jìn)行優(yōu)化處理，并重復(fù)步驟(1)～(2)直至所述TNF-α抑制率大于等于70％；更優(yōu)選地，所述優(yōu)化處理包括下列至少之一：1)重新對間充質(zhì)干細(xì)胞的供體來源進(jìn)行優(yōu)化篩選；比較不同來源供體獲得的細(xì)胞TNFRI是否存在差異；2)對間充質(zhì)干細(xì)胞的分離工藝和擴(kuò)增工藝進(jìn)行優(yōu)化，包括優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)體系和細(xì)胞培養(yǎng)條件；3)比較不同凍存和復(fù)蘇方法對間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的TNFRI是否有影響并進(jìn)行優(yōu)化。

9.一種生產(chǎn)間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，其特征在于，包括：

(a)根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，確定間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)工藝；

(b)利用步驟(a)中所得到的間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)工藝，采用組織生產(chǎn)間充質(zhì)干細(xì)胞。