[發明專利]檢測副溶血性弧菌的試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201911148689.1
• 申請日: 2019-11-21
• 公開（公告）號: CN110734491B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 王慧;邱紅玲;王永
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院;河南省商業科學研究所有限責任公司
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 曹莉

本發明提供了一種檢測副溶血性弧菌的試劑盒及檢測方法。本發明人篩選獲得一株獨特的抗副溶血性弧菌的單克隆抗體，對于不同型別的副溶血性弧菌具有廣譜結合/識別能力，而對于副溶血性弧菌以外的其它菌株則不發生結合/識別，特異性和敏感性俱佳。本發明還提供了含有該單克隆抗體的試劑盒以及利用該單克隆抗體進行副溶血性弧菌檢測的方法。

技術領域

本發明屬于微生物檢測領域，更具體地，本發明涉及檢測副溶血性弧菌的試劑盒及檢測方法。

背景技術

弧菌(Vibrio)是菌體短小，彎曲成弧形，尾部帶鞭毛的革蘭氏陰性菌?；【鷮?Vibrio)為弧菌科的1屬。弧菌屬細菌種類多，分布廣泛，尤其是水中最為常見。

副溶血性弧菌是一種嗜鹽性海洋弧菌，易引起食物中毒，其污染主要來自海產品，如墨魚、海魚、海蝦、海蟹、海蜇，以及含鹽分較高的腌制食品，如咸菜、腌肉等。臨床癥狀以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。在中國，副溶血弧菌是細菌性食物中毒事件最主要病原菌。因此，針對食品及環境中污染的副溶血性弧菌，建立快速有效的檢測技術，實現副溶血弧菌的有效監控，對降低微生物性的食源性疾病的發生，有極其重大的意義。

目前我國食品中副溶血弧菌的檢測主要依據“金標準”的是國標GB/T 4789-2013《食品安全國家標準食品微生物學檢驗副溶血性弧菌檢驗》或PCR檢測方法，國標方法檢測需要專業的微生物技術人員，而PCR方法對儀器設備和檢測環境要求很高。

基于免疫學的ELISA方法操作簡便，檢測時間短，可實現樣品的高通量(最高可達96個樣品)檢測，在食源性致病菌檢測監測與控制體系中發揮著至關重要的作用。但是，ELISA檢測方法中使用的結果的準確性取決于抗體的質量。弧菌類細菌有大量的同源蛋白，而副溶血性弧菌這一種屬又有多個血清型，要篩選出能同時檢測多種血清型的副溶血性弧菌而不與其他細菌發生交叉反應的抗體并非易事。

綜上，本領域很有必要針對副溶血性弧菌開發特異性好且交叉干擾少的抗體，以滿足食品檢測等方面的需求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能特異性識別副溶血性弧菌的單克隆抗體及其應用。

一種結合分子，包含以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:8所示的重鏈CDR1，SEQ IDNO:9所示的重鏈CDR2和SEQ ID NO:10所示的重鏈CDR3，SEQ ID NO:14所示的輕鏈CDR1，SEQID NO:15所示的輕鏈CDR2和SEQ ID NO:16所示的輕鏈CDR3。

上述結合分子，包含重鏈可變區，所述的重鏈可變區具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

上述結合分子，包含輕鏈可變區，所述的輕鏈可變區具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

在另一優選例中，所述的結合分子包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其重鏈可變區和輕鏈可變區分別具有SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

在另一優選例中，所述的結合分子是單克隆抗體。

編碼上述結合分子的核酸分子。

上述結合分子在制備用于檢測副溶血性弧菌的試劑中的用途。

在本發明的另一方面，提供一種表達載體，所述表達載體中含有編碼所述的結合分子的DNA。

在本發明的另一方面，提供一種宿主細胞，所述宿主細胞中含有所述的表達載體。

一種免疫輟合物，其特征在于，所述的免疫輟合物包括：

所述的結合分子；以及與所述結合分子連接的可檢測標記物；較佳地，所述可檢測標記物包括：熒光標記物、顯色標記物；更佳地包括：生物素。