[發明專利]一種基于單層多孔膜的卵清蛋白的固定化方法

在審

• 申請號: 201911146582.3
• 申請日: 2019-11-21
• 公開（公告）號: CN110818801A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 張思敏;彭博;林松毅;姜鵬飛;王星煜
• 申請（專利權）人: 大連工業大學
• 主分類號: C07K17/08
• 分類號: C07K17/08;C07K14/77;G01N5/04;G01N13/00
• 代理公司: 大連格智知識產權代理有限公司 21238
• 代理人: 劉琦

本發明公開了一種基于單層多孔膜的卵清蛋白的固定化方法，以聚苯乙烯和雙十二烷基二甲基溴化銨為原料，加入二氯甲烷，制備成單層多孔膜溶液；將卵清蛋白溶液和所述單層多孔膜溶液混勻，得微乳液；將所述微乳液滴在玻璃片上，置于溫度25～35℃、濕度75％～85％的環境下，放置6～10小時，形成附有卵清蛋白的單層多孔膜。本發明實現了簡單易操作的蛋白固定化，制備的附有卵清蛋白的單層多孔膜，膜結構均勻、穩定性良好且實現了卵清蛋白的精準捕獲。在食品加工、生物傳感、生物檢測等領域有重要的應用價值。

技術領域

本發明屬于多孔膜的制備和蛋白固定化領域，具體涉及一種基于單層多孔膜的卵清蛋白的固定化方法。

背景技術

蛋白固定化是應用于藥物傳遞、環境科學和蛋白質組學等許多領域的重要技術(Finbloom J A,Francis M B.Current Opinion in Chemical Biology,2018,46：91-98.)，其在生物技術和生物醫學領域也有著廣泛的應用(Sunanda N,Yanxiong P,Hui L,etal.ACS Applied Nano Materials,2018,1(8)：4053-4063.)。它將隨機無序的蛋白質均勻有序的排布在固相載體的表面，以達到分子識別、臨床診斷、環境監測、質量控制等目的(Xiang W J,Rehm B H A.Biomacromolecules,2018.)。特異性的將蛋白固定在固相載體的表面還可以實現對分析物的高通量檢測。蛋白固定化具有可反應性和穩定性(Grajales D,Mateos J C,Padro D,et al.New Biotechnology,2018.)，還具有環境污染小、節約資源等優點，符合國家政策可持續發展的要求，能夠在工業生產中大規模的使用，在生物領域和化工領域可以得到廣泛應用，在應用價值上也具有重要的現實意義。通常，最常用的蛋白固定化方法有物理吸附法、化學偶聯法(Liu D M,Chen J,Shi Y P.Talanta,2017,164：548-555.)、包衣法和交聯聚合法(Lim S,Jung G A,Muckom R J,et al.ChemicalCommunications,2019,55(6)：806-809.)。但是，每種方法都有不足之處。例如，物理吸附固定化的蛋白質很容易從載體上脫落(Williams D M,Gilad K,Hadi I,et al.ACS AppliedNano Materials,2018.)。運用化學偶聯法時雖然共價鍵能與蛋白質緊密結合，但多點共價鍵的連接可能會降低酶的活性。此外，包衣法和交聯聚合法可能會遇到底物或產物的傳質和擴散阻力。卵清蛋白為蛋清中的主要蛋白質(Abeyrathne E D N S,Huang X,Ahn DU.Poultry Science,2018,97(4).)，在食品加工領域有著廣泛的應用。卵清蛋白使用方便、功能性佳，具有溶解性、持水力、起泡性、凝膠性、乳化性的特性。具有來源廣泛、制備容易、價格低廉等優點，是開發新型天然生物抑菌劑的重要資源。長期以來，對卵清蛋白的研究多集中于結構、抗氧化性、功能特性等方面。實現卵清蛋白在單層膜上的固定化，有望實現在生物傳感、生物醫學等方面的應用。