[發明專利]一種基于單層多孔膜的卵清蛋白的固定化方法

在審

• 申請號: 201911146582.3
• 申請日: 2019-11-21
• 公開（公告）號: CN110818801A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 張思敏;彭博;林松毅;姜鵬飛;王星煜
• 申請（專利權）人: 大連工業大學
• 主分類號: C07K17/08
• 分類號: C07K17/08;C07K14/77;G01N5/04;G01N13/00
• 代理公司: 大連格智知識產權代理有限公司 21238
• 代理人: 劉琦

1.一種基于單層多孔膜的卵清蛋白的固定化方法，其特征在于，包括步驟：

S1、單層多孔膜溶液的制備：取聚苯乙烯和雙十二烷基二甲基溴化銨混合，再加入二氯甲烷，攪拌使其溶解混勻，得單層多孔膜溶液；其中，所述單層多孔膜溶液中，聚苯乙烯的濃度為4～8mg/mL，雙十二烷基二甲基溴化銨的濃度為0.3～0.7mg/mL；

S2、配制卵清蛋白溶液：取卵清蛋白加入PBS緩沖液，配置成卵清蛋白濃度是4～6mg/mL的卵清蛋白溶液；

S3、附有卵清蛋白的單層多孔膜微乳液的制備：將步驟S2所述卵清蛋白溶液和步驟S1所述單層多孔膜溶液按體積比15:1～25:1混合，攪拌、超聲，使其均勻混合，得微乳液；

S4、附有卵清蛋白的單層多孔膜OPD的制備：取步驟S3所述微乳液，滴在玻璃片上，置于溫度25～35℃、濕度75％～85％的環境下，放置6～10小時，在玻璃片上形成的薄膜為附有卵清蛋白的單層多孔膜OPD。

2.根據權利要求1所述基于單層多孔膜的卵清蛋白的固定化方法，其特征在于，步驟S1所述攪拌具體為每5分鐘攪拌一次，共攪拌3～4次。

3.根據權利要求1所述基于單層多孔膜的卵清蛋白的固定化方法，其特征在于，步驟S3所述攪拌具體為用玻璃棒攪拌1～2min。

4.根據權利要求1所述基于單層多孔膜的卵清蛋白的固定化方法，其特征在于，步驟S3所述超聲為：頻率40KHz，時間30秒。

5.根據權利要求1所述基于單層多孔膜的卵清蛋白的固定化方法，其特征在于，步驟S4所述微乳液的體積是20μL。

6.根據權利要求1所述基于單層多孔膜的卵清蛋白的固定化方法，其特征在于，包括步驟：

S1、單層多孔膜溶液的制備：稱取0.03g的聚苯乙烯和0.0025g的雙十二烷基二甲基溴化銨，加入5mL的二氯甲烷，每5分鐘攪拌一次，攪拌4次至溶解，得單層多孔膜溶液；

S2、卵清蛋白溶液的制備：取5mg卵清蛋白，加入1mL、pH為7.4的PBS緩沖溶液，混勻，得到濃度為5mg/mL的卵清蛋白溶液；

S3、附有卵清蛋白的單層多孔膜微乳液的制備：取200μL步驟S2所述卵清蛋白溶液加入5mL步驟S1所述的單層多孔膜溶液，用玻璃棒攪拌1分鐘，40KHz、超聲30秒，使其混合均勻，得微乳液；

S4、附有卵清蛋白的單層多孔膜OPD的制備：取20μL步驟S3所述微乳液，滴在玻璃片上，置于溫度為25℃，濕度為85％的環境下，靜置8小時，在玻璃片上形成的薄膜為附有卵清蛋白的單層多孔膜OPD。