[發明專利]一種β-葡萄糖苷酶及其制備方法與應用在審
| 申請號： | 201911146480.1 | 申請日： | 2019-11-21 |
| 公開（公告）號： | CN111304182A | 公開（公告）日： | 2020-06-19 |
| 發明（設計）人： | 樊明濤;張杰;趙寧;戚一曼 | 申請（專利權）人： | 西北農林科技大學 |
| 主分類號： | C12N9/42 | 分類號： | C12N9/42;C12N15/56;C12N15/70;C12G1/022 |
| 代理公司： | 西安恒泰知識產權代理事務所 61216 | 代理人： | 史玫 |
| 地址： | 712100 陜*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 葡萄 糖苷酶 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種β-葡萄糖苷酶，其特征在于，所述β-葡萄糖苷酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.權利要求1所述β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)基因組DNA的提?。禾崛【祁惥魄蚓鶶D-2a的基因組DNA；
(2)目的基因擴增：以步驟(1)得到的基因組DNA為模板，進行聚合酶鏈式反應，擴增目的基因；
(3)載體構建：將擴增得到的目的基因插入表達載體PcoldI構建表達質粒PcoldI-0224；
(4)轉化：將表達質粒PcoldI-0224導入大腸桿菌感受態細胞DH5α，得到轉化子；
(5)表達：將轉化子進行擴大培養，提取培養物中的重組表達質粒PcoldI-0224導入感受態細胞BL21，之后進行擴大培養；
(6)純化：對步驟(5)的培養物依次進行裂解、過濾，之后依次采用His重力鎳柱和超濾管收集β-葡萄糖苷酶。
3.如權利要求2所述的β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征在于，步驟(1)中提取對數中期酒類酒球菌SD-2a的基因組DNA。
4.如權利要求2中所述的β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征在于，步驟(2)擴增時所用引物序列分別為：
上游引物：5’-CTC
下游引物：5’-TGA
5.如權利要求2所述的β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所用的DNA聚合酶為PrimeSTAR Max DNA Polymerase，PCR反應程序為：95℃預變性10min；98℃變性10s，55℃退火15s，72℃延伸60s，30次循環；72℃保溫8min。
6.權利要求1所述β-葡萄糖苷酶用于葡萄酒釀制的應用。
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