[發(fā)明專利]一種基于表面增強(qiáng)拉曼散射的金納米標(biāo)記的試紙條、制備方法及使用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911146095.7
• 申請(qǐng)日: 2019-11-19
• 公開（公告）號(hào): CN110779905B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖瑞;汪崇文;陸路春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N21/65
• 分類號(hào): G01N21/65;G01N33/68;G01N33/558;G01N33/532;B82Y40/00
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

本發(fā)明公開了一種基于表面增強(qiáng)拉曼散射的金納米標(biāo)記的試紙條、制備方法及使用方法，涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。其包括共軛墊，共軛墊上含有金納米棒和拉曼分子，拉曼分子修飾于金納米棒的表面，制備共軛墊所用的金納米棒的局域表面等離子體共振峰(LSPR)可以根據(jù)需要自由調(diào)整。試紙條具有大散射截面和明顯的拉曼散射峰且沒有熒光干擾，具有靈敏度高、特異性好的優(yōu)點(diǎn)。該試紙條使用該方法簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快，檢測(cè)范圍廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種基于表面增強(qiáng)拉曼散射的金納米標(biāo)記的試紙條、制備方法及使用方法。

背景技術(shù)

癌癥是世界上最具生命威脅的疾病之一，由于它的癥狀通常要到末期才會(huì)出現(xiàn)，所以由癌癥導(dǎo)致的死亡率較高。因此，癌癥的早期診斷可以指導(dǎo)積極治療并提高患者的生存率。其中癌癥生物標(biāo)志物的檢測(cè)已成為癌癥的早期診斷的最有前途的方法之一。腫瘤發(fā)生和治療反應(yīng)的關(guān)鍵指標(biāo)是癌癥生物標(biāo)志物濃度在人類生物標(biāo)本如血清，血液，尿液，或唾液等中的變化。目前用于腫瘤生物標(biāo)志物檢測(cè)的方法主要有化學(xué)發(fā)光免疫法、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、免疫印跡法、電化學(xué)免疫分析法等，但這些方法均存在著操作繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、費(fèi)用高等缺點(diǎn)。上述缺陷阻礙了現(xiàn)有的標(biāo)志物檢測(cè)方法在醫(yī)療點(diǎn)檢測(cè)的廣泛應(yīng)用。對(duì)于腫瘤標(biāo)志物的診斷，建立靈敏、方便的檢測(cè)方法顯得極為必要。

側(cè)流免疫分析法(LFIA)具有操作簡(jiǎn)單、分析速度快、成本低等優(yōu)點(diǎn)，然而傳統(tǒng)的免疫側(cè)流分析以膠體金為標(biāo)記，依賴色度信號(hào)，具有靈敏度低、有限的定性和半定量的缺點(diǎn)。

表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)是一種高靈敏度的有效檢測(cè)工具，它可以解決傳統(tǒng)免疫側(cè)流分析的局限性。但是現(xiàn)有基于SERS的金或銀納米顆粒的局域表面等離子體共振峰(LSPR)在400-600nm之間，與通常使用的785nm激發(fā)波長(zhǎng)不匹配，因此，在SERS信號(hào)增強(qiáng)性能方面并不理想。

鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種基于表面增強(qiáng)拉曼散射的金納米標(biāo)記的試紙條、制備方法及使用方法以解決上述技術(shù)問題。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種基于表面增強(qiáng)拉曼散射的金納米標(biāo)記的試紙條，其包括共軛墊，共軛墊上含有金納米棒和拉曼分子，拉曼分子修飾于金納米棒的表面，制備共軛墊所用的金納米棒的局域表面等離子體共振峰(LSPR)可自適應(yīng)調(diào)整。

在本發(fā)明應(yīng)用較佳的實(shí)施例中，上述金納米棒的表面還修飾有牛血清白蛋白，牛血清白蛋白通過羧基端肽鏈與檢測(cè)抗體的氨基端肽鏈偶聯(lián)；

優(yōu)選的，檢測(cè)抗體為腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)抗體；

優(yōu)選的，檢測(cè)抗體為鼠抗人甲胎蛋白檢測(cè)抗體。

該試紙條包括共軛墊，在共軛墊上含有金納米棒，在金納米棒表面修飾有拉曼分子和牛血清白蛋白。拉曼分子作為拉曼報(bào)告分子，用于反饋在激發(fā)光下最大表面增強(qiáng)拉曼散射的信號(hào)。牛血清白蛋白(BSA)具有增強(qiáng)金納米棒的穩(wěn)定性的作用，防止金納米棒彼此相互聚集，影響金納米棒的性能。發(fā)明人經(jīng)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，修飾有BSA的金納米棒能在較高的鹽離子強(qiáng)度和雜質(zhì)環(huán)境下保持活性。在金納米棒表面修飾牛血清白蛋白以增強(qiáng)金納米棒在生物樣品中的高穩(wěn)定性，防止金納米棒彼此相互聚集，影響金納米棒的性能。

檢測(cè)抗體通過氨基與BSA的羧基進(jìn)行偶聯(lián)，檢測(cè)抗體可以實(shí)現(xiàn)抗原(腫瘤標(biāo)志物)的特異性結(jié)合，抗原又可以與硝酸纖維素膜上的抗體特異性結(jié)合，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)捕獲抗原的金納米棒復(fù)合物進(jìn)行定性和定量的檢測(cè)。

本發(fā)明創(chuàng)造性的發(fā)現(xiàn)，通過控制硝酸銀的含量可以實(shí)現(xiàn)制備共軛墊所用的金納米棒的局域表面等離子體共振峰的調(diào)節(jié)。這樣可以滿足常規(guī)的785nm激發(fā)波長(zhǎng)的需求，從而使得表面增強(qiáng)拉曼散射信號(hào)增加更為明顯，有利于對(duì)低含量的生物標(biāo)志物的檢測(cè)。