[發(fā)明專利]一種超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)血漿中ADMA和SDMA的方法及試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911142574.1
• 申請(qǐng)日: 2019-11-20
• 公開（公告）號(hào): CN112180017A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 成曉亮;李美娟;鄭可嘉;張偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京品生醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 上海宏京知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31297
• 代理人: 李敏

本發(fā)明涉及血液檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)血漿中ADMA和SDMA的方法，包括：步驟一、將血漿處理后取上清液進(jìn)樣，經(jīng)過超高效液相色譜將ADMA和SDMA與血漿基質(zhì)分離；步驟二、將超高效液相色譜分離的ADMA和SDMA再通過串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)建立的校準(zhǔn)曲線計(jì)算ADMA和SDMA的含量。本發(fā)明解決現(xiàn)有技術(shù)中沒有共同檢測(cè)ADMA和SDMA含量的檢測(cè)方法的問題。本發(fā)明具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確且前處理過程較簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及血液檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)血漿中ADMA和SDMA的方法及試劑盒。

背景技術(shù)

一氧化氮(NO)是內(nèi)皮衍生的血管活性物質(zhì)之一，對(duì)于維持內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)起了重要作用，低水平的NO與內(nèi)皮功能受損有關(guān)。非對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)和對(duì)稱二甲基精氨酸(SDMA)是L-精氨酸的代謝產(chǎn)物。正常情況下，精氨酸被血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)源性一氧化氮合成酶轉(zhuǎn)化成一氧化氮和L-瓜氨酸。ADMA可以競(jìng)爭(zhēng)性的抑制一氧化氮合成酶的功能，從而減少一氧化氮的產(chǎn)量，SDMA通過減少細(xì)胞中的精氨酸間接影響一氧化氮產(chǎn)生。最終，因一氧化氮缺乏，血管內(nèi)皮細(xì)胞功能不全，導(dǎo)致血管動(dòng)脈粥樣硬化。

因此，人體ADMA和SDMA含量的升高或者降低與心腦血管類疾病風(fēng)險(xiǎn)息息相關(guān)，其在血漿中含量的高低對(duì)于評(píng)估人體健康是至關(guān)重要的。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)血漿中ADMA和SDMA的方法，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中沒有共同檢測(cè)ADMA和SDMA含量的檢測(cè)方法的問題，本發(fā)明還提供一種用于ADMA和SDMA定量分析的試劑盒。本發(fā)明具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確且前處理過程較簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，

本發(fā)明第一方面，提供一種超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)血漿中ADMA和SDMA的方法，包括如下步驟：

步驟一、將血漿處理后取上清液進(jìn)樣，經(jīng)過超高效液相色譜將ADMA和SDMA與血漿基質(zhì)分離，其中色譜條件如下：色譜柱為三鍵鍵合式烷基柱，色譜柱柱溫為30～50℃，進(jìn)樣量為0.5～5μL，流速為0.1～1mL/min，流動(dòng)相A為0.2mM甲酸銨和體積分?jǐn)?shù)0.004％甲酸的水溶液，流動(dòng)相B為乙腈；

步驟二、將超高效液相色譜分離的ADMA和SDMA再通過串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)建立的校準(zhǔn)曲線計(jì)算ADMA和SDMA的含量，其中質(zhì)譜條件如下：噴霧電壓2.5～3.5kV，去溶劑溫度為80～140℃，霧化氣溫度為350～450℃，霧化氣流速為700～900L/h，錐孔氣流速為120～180L/h。

超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)血漿中ADMA和SDMA的方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確且前處理過程較簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)，6min之內(nèi)完成待測(cè)物的分離和檢測(cè)，基質(zhì)效應(yīng)與精密度基本滿足要求，可用于臨床上ADMA和SDMA的定量分析，為臨床上心腦血管疾病的健康評(píng)估提供一種可靠的檢測(cè)方法。

采用ID-UPLC-MS/MS方法測(cè)定了人體血漿中的非對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)和對(duì)稱二甲基精氨酸(SDMA)。同時(shí)針對(duì)目標(biāo)物的出峰時(shí)間和離子對(duì)進(jìn)行檢測(cè)，靈敏度高，與此同時(shí)，采用同位素內(nèi)標(biāo)法定量可以極大的消除基質(zhì)干擾，而且不受預(yù)處理過程、上樣體積和流動(dòng)相等條件的影響，能夠達(dá)到準(zhǔn)確定量。

于本發(fā)明的一實(shí)施例中，所述步驟一中血漿處理的具體過程為：將血漿和內(nèi)標(biāo)液B按照體積比為1：(50～80)加入離心管中，先渦旋10～30s、振蕩8～10min后進(jìn)行離心，離心速率為12000～18000r/min，離心時(shí)間為8～12min，離心后取上清液作為待測(cè)樣。

于本發(fā)明的一實(shí)施例中，所述血漿和內(nèi)標(biāo)液B按照體積比為1：60，離心速率為15000r/min，離心時(shí)間為10min。

于本發(fā)明的一實(shí)施例中，所述的血漿為人或動(dòng)物的血漿。