[發明專利]一種超高效液相色譜串聯質譜檢測血漿中ADMA和SDMA的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201911142574.1
• 申請日: 2019-11-20
• 公開（公告）號: CN112180017A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 成曉亮;李美娟;鄭可嘉;張偉
• 申請（專利權）人: 南京品生醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 上海宏京知識產權代理事務所(普通合伙) 31297
• 代理人: 李敏

1.一種超高效液相色譜串聯質譜檢測血漿中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、將血漿處理后取上清液進樣，經過超高效液相色譜將ADMA和SDMA與血漿基質分離，其中色譜條件如下：色譜柱為三鍵鍵合式烷基柱，色譜柱柱溫為30～50℃，進樣量為0.5～5μL，流速為0.1～1mL/min，流動相A為0.2mM甲酸銨和體積分數0.004％甲酸的水溶液，流動相B為乙腈；

步驟二、將超高效液相色譜分離的ADMA和SDMA再通過串聯質譜進行檢測，根據建立的校準曲線計算ADMA和SDMA的含量，其中質譜條件如下：噴霧電壓2.5～3.5kV，去溶劑溫度為80～140℃，霧化氣溫度為350～450℃，霧化氣流速為700～900L/h，錐孔氣流速為120～180L/h。

2.根據權利要求1所述的一種超高效液相色譜串聯質譜檢測血漿中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，所述步驟一中血漿處理的具體過程為：將血漿和內標液B按照體積比為1：(50～80)加入離心管中，先渦旋10～30s、振蕩8～10min后進行離心，離心速率為12000～18000r/min，離心時間為8～12min，離心后取上清液作為待測樣。

3.根據權利要求2所述的一種超高效液相色譜串聯質譜檢測血漿中ADMA和SDMA的方法，其特征在于：所述血漿和內標液B按照體積比為1：60，離心速率為15000r/min，離心時間為10min。

4.根據權利要求2或3所述的一種超高效液相色譜串聯質譜檢測血漿中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，所述內標液B的制備過程為：取同位素內標品ADMA-d7加入體積分數為50％的甲醇水溶液中溶解，得到摩爾濃度為10mM的同位素內標溶液，再用體積分數為50％的甲醇水溶液將該同位素內標溶液稀釋至摩爾濃度為40μM的內標液A，將內標液A和甲醇按照體積比為1：2000混合即得內標液B。

5.根據權利要求1所述的一種超高效液相色譜串聯質譜檢測血漿中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，所述色譜條件如下：色譜柱為ACQUITY UPLC BEH Amide，2.1×100mm，1.7μm；色譜柱柱溫為40℃；進樣量為1μL；流速為0.4mL/min；流動相梯度洗脫參數如表1所示：

表格1

，

其中流動相A為0.2mM甲酸銨和體積分數0.004％甲酸的水溶液，流動相B為乙腈。

6.根據權利要求2所述的一種超高效液相色譜串聯質譜檢測血漿中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，所述校準曲線的制作過程為：將含ADMA和SDMA各0.1mM的標準品儲備液與空白血漿基質溶液按照體積比為1：19混合后作為第一個高值濃度點，其摩爾濃度為5μM；再將第一個高值濃度點的溶液與空白血漿基質溶液按照體積比為1：1混合后作為第二高值濃度點，其摩爾濃度為2.5μM；再將第二高值濃度點的溶液與空白血漿基質溶液逐級稀釋得到其余六個校準點；再將8個濃度點的溶液分別與內標液B按照體積比為1：60加入離心管中，先渦旋10～30s、振蕩8～10min后進行離心，再分別取上清液進樣，通過串聯質譜進行檢測，以標準品與內標物的濃度比為X軸，標準品與內標物的峰面積比為Y軸，建立校準曲線，即可。

7.根據權利要求6所述的一種超高效液相色譜串聯質譜檢測血漿中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，所述空白血漿基質溶液為50mg/mL牛血清白蛋白水溶液。

8.根據權利要求1或6所述的一種超高效液相色譜串聯質譜檢測血漿中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，所述質譜條件如下：噴霧電壓3.0kV；去溶劑溫度為120℃；霧化氣溫度為400℃；霧化氣流速為800L/h；錐孔氣流速為150L/h。