[發明專利]維生素k2的降壓作用

在審

• 申請號: 201911137791.1
• 申請日: 2019-11-11
• 公開（公告）號: CN110898045A
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 陳利國;劉天浩;陶文聰;陳偉豪;陳旭東;梁秋兒;肖雅
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: A61K31/122
• 分類號: A61K31/122;A61P9/12;A61K49/00;G01N33/68;G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種維生素k2的降壓作用，其特征在于：所述維生素k2的降壓作用包括選取實驗動物：SPF級C57BL/6J小鼠，雄性，體質量23±2g，購買自廣州中醫藥大學實驗動物中心(實驗單位許可證號：SYXK(粵)2017-0174)，(小鼠許可證號：SCXK(粵)2018-0034)，予以自由飲食和飲水10天后，開始實驗，該維生素k2的降壓證明方法包括如下步驟：

(1)動物分組：將野生型C57BL/6小鼠按照隨機數表分組法分為正常組，高鹽組，高鹽+VK2組，每組8只；

(2)模型構建：野生型C57BL/6小鼠，8％高鹽誘導4周復制高鹽誘導的高血壓小鼠模型；

(3)尾動脈測壓法，觀察小鼠血壓變化：每周下午同一時間通過Blood Pressure 2000對所有小鼠的血壓進行測量，取平均10次測量均值；

(4)酶聯免疫吸附實驗法(ELISA)檢測相關細胞因子NO、VEGF、Ang I、ET-1的表達：實驗開始4周后，殺鼠，取血清，檢測。操作步驟方法按照試劑盒說明書進行1.標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；2.加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔，在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻；3.加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外；4.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘；5.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用；6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干；7.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘；8.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)；9.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)，測定應在加終止液后15分鐘以內進行；

(5)統計分析：所有數據使用表示，用SPSS19.0統計分析，組間使用t檢驗，各組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05有統計學意義；

(6)得出結論：高鹽可是小鼠血壓升高，Vk2表達下降，并且Vk2阻滯高鹽誘導的小鼠血壓升高及且具有保護內皮細胞因子的作用，VK2防治高血壓病的功能。

2.根據權利要求1所述的維生素k2的降壓作用，其特征在于：所述小鼠的飼養飼料為：1、8％高鹽飼料：代碼(LAD0011HF8)購買自南通特洛菲飼料科技有限公司(生產許可證號：蘇飼證(2014)06092)，經南通市邁克爾輻照有限公司(輻照安全許可證：國環輻證[00048])輻照滅菌(滅菌批號：19072705)；2、8％高鹽飼料+0.036％維生素k2飼料：購買自自南通特洛菲飼料科技有限公司(生產許可證號：蘇飼證(2014)06092)，經南通市邁克爾輻照有限公司(輻照安全許可證：國環輻證[00048])輻照滅菌(滅菌批號：19072705)；維生素k2購買自衛材(中國)藥業有限公司(進口藥品注冊證號：H20100462)。