[發(fā)明專利]一種酵素中有機(jī)酸的快速檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201911130764.1
• 申請日: 2019-11-19
• 公開（公告）號(hào): CN110749684A
• 公開（公告）日: 2020-02-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮聞達(dá);陳鳳婷;邵婉晴;靖廣旭;林鍇;黃偉達(dá);吳奇能
• 申請（專利權(quán)）人: 上海合慶火龍果科技開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 31306 上海愉騰專利代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 唐海波

本發(fā)明涉及一種酵素中有機(jī)酸的快速檢測方法，包括如下步驟：(1)配置標(biāo)準(zhǔn)品有機(jī)酸甲酯混合物；(2)酵素中有機(jī)酸的提取；(3)配置待測有機(jī)酸甲酯混合物；(4)采用氣相色譜?質(zhì)譜測定：取標(biāo)準(zhǔn)品有機(jī)酸甲酯混合物、待測有機(jī)酸甲酯混合物進(jìn)樣分析，采用外標(biāo)法計(jì)算各檢出有機(jī)酸的相對百分含量。本發(fā)明通過優(yōu)化酵素中有機(jī)酸的提取和甲酯化衍生方法，通過離心分離出酵素中的可溶性雜質(zhì)沉淀，采用硫酸?甲醇溶液甲酯化得到有機(jī)酸甲酯混合物，進(jìn)而通過GC?MS聯(lián)用法，分析酵素中有機(jī)酸的含量，快速簡便，微量分析，靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于檢測分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀用技術(shù)分析酵素中有機(jī)酸的成分及其含量的方法。

背景技術(shù)

酵素是以新鮮的蔬菜、水果、糙米、藥食同源中藥等植物為原料，經(jīng)過榨汁或萃取一系列工藝后，再添加酵母菌、乳酸菌等發(fā)酵菌株進(jìn)行發(fā)酵所產(chǎn)生的含有豐富的糖類、有機(jī)酸、礦物質(zhì)、維生素、酚類、萜類等營養(yǎng)成分以及一些重要的酶類等生物活性物質(zhì)的混合發(fā)酵液。

酵素的發(fā)展主要是由于酵素中各種短鏈脂肪酸的存在，短鏈脂肪酸被后腸迅速吸收后，既儲(chǔ)存了能量又降低了滲透壓，并且短鏈脂肪酸對于維持大腸的正常功能和結(jié)腸上皮細(xì)胞的形態(tài)和功能具有重要作用。短鏈脂肪酸還可促進(jìn)鈉的吸收，丁酸在這方面的作用比乙酸和丙酸更強(qiáng)并且丁酸可增加乳酸桿菌的產(chǎn)量而減少大腸桿菌的數(shù)量。

氣相色譜法(GC)雖然在很多食品成分分析方面得到應(yīng)用，但當(dāng)酵素中有機(jī)酸組成復(fù)雜時(shí)，會(huì)增加樣品的定性難度。與GC相比，GC-MS(氣質(zhì)聯(lián)用法)測定有機(jī)酸近十年得到了應(yīng)用，該方法靈敏度高，分析快速，精確度高適合于同時(shí)測定多組分有機(jī)酸甲酯待測樣品。使用GC或GC-MS分析有機(jī)酸中羧酸類成分時(shí)，由于羧酸的極性強(qiáng)，容易和色譜柱相吸附，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。此外，有機(jī)酸中的長鏈有機(jī)酸的沸點(diǎn)高、高溫條件時(shí)揮發(fā)性差、影響有機(jī)酸分離效果，當(dāng)GC分析時(shí)溫度過高會(huì)損傷色譜柱，所以，為避免上述干擾影響測定結(jié)果，并延長色譜柱壽命，一般需先將有機(jī)酸提取，再經(jīng)甲酯化等前處理，目前現(xiàn)有甲酯化方法普遍是常溫甲酯化，費(fèi)時(shí)較長需要24h，本方法使用水浴加熱甲酯化處理，僅需要1-2h十分快捷，得到該有機(jī)酸對應(yīng)的有機(jī)酸甲酯，而后上機(jī)分析，并通過換算計(jì)算有機(jī)酸的含量。而目前還沒有關(guān)于酵素中有機(jī)酸的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中的不足，在于提供一種酵素中有機(jī)酸的快速檢測方法，能夠在樣品量較少的情況下，快速準(zhǔn)確的檢測出酵素中有機(jī)酸的含量。

本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下：

一種酵素中有機(jī)酸的快速檢測方法，包括如下步驟：

(1)配置標(biāo)準(zhǔn)品有機(jī)酸甲酯混合物；

(2)酵素中有機(jī)酸的提取：取酵素樣品于離心管中離心，分離其中雜質(zhì)，得到含有有機(jī)酸的酵素上清液；

(3)取步驟(2)中得到的酵素上清液于離心管中，加入硫酸-甲醇溶液，水浴加熱，再加入二氯甲烷，飽和NaCl，混勻、靜置分層，吸取二氯甲烷有機(jī)相，使用濾頭進(jìn)行過濾，得待測有機(jī)酸甲酯混合物；

(4)采用氣相色譜-質(zhì)譜測定：取步驟(1)中標(biāo)準(zhǔn)品有機(jī)酸甲酯混合物、步驟(3)中得到的待測有機(jī)酸甲酯混合物進(jìn)樣分析，采用外標(biāo)法計(jì)算各檢出有機(jī)酸的相對百分含量。

優(yōu)選的，配置標(biāo)準(zhǔn)品有機(jī)酸甲酯混合物包括如下步驟：取各有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)液于離心管中，加入硫酸-甲醇溶液，水浴加熱，再加入二氯甲烷，飽和NaCl，混勻、靜置分層，吸取二氯甲烷有機(jī)相，使用濾頭進(jìn)行過濾，得標(biāo)準(zhǔn)品有機(jī)酸甲酯混合物。

優(yōu)選的，步驟(2)中，離心管置于10000～14000r/min離心機(jī)中離心3～4分鐘。

優(yōu)選的，步驟(2)中，取1.5mL酵素樣品于1.5mL離心管中離心。

優(yōu)選的，步驟(3)中，水浴加熱的加熱溫度為55～65℃，加熱時(shí)間為1.5～2.5h。