[發明專利]一種酵素中有機酸的快速檢測方法

在審

• 申請號: 201911130764.1
• 申請日: 2019-11-19
• 公開（公告）號: CN110749684A
• 公開（公告）日: 2020-02-04
• 發明（設計）人: 馮聞達;陳鳳婷;邵婉晴;靖廣旭;林鍇;黃偉達;吳奇能
• 申請（專利權）人: 上海合慶火龍果科技開發有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 31306 上海愉騰專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 唐海波

1.一種酵素中有機酸的快速檢測方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)配置標準品有機酸甲酯混合物；

(2)酵素中有機酸的提取：取酵素樣品于離心管中離心，分離其中雜質，得到含有有機酸的酵素上清液；

(3)取步驟(2)中得到的酵素上清液于離心管中，加入硫酸-甲醇溶液，水浴加熱，再加入二氯甲烷，飽和NaCl，混勻、靜置分層，吸取二氯甲烷有機相，使用濾頭進行過濾，得待測有機酸甲酯混合物；

(4)采用氣相色譜-質譜測定：取步驟(1)中標準品有機酸甲酯混合物、步驟(3)中得到的待測有機酸甲酯混合物進樣分析，采用外標法計算各檢出有機酸的相對百分含量。

2.根據權利要求1所述的快速檢測方法，其特征在于，配置標準品有機酸甲酯混合物包括如下步驟：取各有機酸標準液于離心管中，加入硫酸-甲醇溶液，水浴加熱，再加入二氯甲烷，飽和NaCl，混勻、靜置分層，吸取二氯甲烷有機相，使用濾頭進行過濾，得標準品有機酸甲酯混合物。

3.根據權利要求1或2所述的快速檢測方法，其特征在于步驟(2)中，離心管置于10000～14000r/min離心機中離心3～4分鐘。

4.根據權利要求3所述的快速檢測方法，其特征在于步驟(2)中，取1.5mL酵素樣品于1.5mL離心管中離心。

5.根據權利要求1或2所述的快速檢測方法，其特征在于步驟(3)中，水浴加熱的加熱溫度為55～65℃，加熱時間為1.5～2.5h。

6.根據權利要求5所述的快速檢測方法，其特征在于步驟(3)中，硫酸-甲醇溶液的體積比為13％，所使用的濾頭孔徑為0.45um。

7.根據權利要求6所述的快速檢測方法，其特征在于步驟(3)中，取步驟(1)中得到的酵素上清液1mL于50mL離心管中，加入硫酸-甲醇溶液10mL，水浴加熱，再加入二氯甲烷5mL，飽和NaCl5ml，震蕩混勻、靜置分層，吸取二氯甲烷有機相，使用濾頭進行過濾，得待測有機酸甲酯混合物。

8.根據權利要求1或2所述的快速檢測方法，其特征在于步驟(4)中，氣相色譜-質譜條件為：進樣口溫度為260℃，離子源為250℃，氣質接口為280℃，進樣量1.0uL，分流比10:1，吹掃流量3.0ml/min；氣相色譜柱溫箱升溫程序為：40℃保持5min，然后以10℃/min升溫至280℃保持5min，載氣為99.999％高純度氦氣；質譜條件：離子源EI源，電子能量70eV，接口溫度250℃，離子源溫度230℃，四級桿溫度280℃，進樣口溫度250℃，質量掃描范圍m/z30-450，采集方式Scan。