[發明專利]一種用于檢測甘膽酸的納米酶聯免疫吸附分析方法在審
| 申請號： | 201911125727.1 | 申請日： | 2019-11-18 |
| 公開（公告）號： | CN110927378A | 公開（公告）日： | 2020-03-27 |
| 發明（設計）人： | 何綺怡;趙肅清;方巖雄;楊慧怡;崔錫平;陳瑩珊 | 申請（專利權）人： | 廣東工業大學 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577;G01N33/53 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102 | 代理人： | 陳嘉毅 |
| 地址： | 510060 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 檢測 膽酸 納米 免疫 吸附 分析 方法 | ||
1.一種用于檢測甘膽酸的納米酶聯免疫吸附分析方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1.普魯士藍納米立方體的合成：采用PVP作為穩定劑，一鍋法得到普魯士藍納米立方體；
S2.普魯士藍納米立方體-單克隆抗體的偶聯：調整普魯士藍納米立方體，通過靜電作用結合單克隆抗體；
S3.棋盤模擬酶聯免疫分析方法確定包被濃度與抗體用量：改變包被GCA-OVA的濃度，改變抗體偶聯的稀釋比例，確定包被濃度與抗體用量；
S4.甘膽酸標準曲線的確定：以甘膽酸濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，得到甘膽酸標準曲線。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1所述普魯士藍納米立方體的合成的具體步驟為：將PVP與普魯士藍溶解在HCl中，均勻攪拌后，放置于烘箱中反應10～30小時，冷卻，離心后取沉淀，即得所述普魯士藍納米立方體。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述HCl的物質的量濃度為0.005～0.015M。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2所述普魯士藍納米立方體-單克隆抗體的偶聯的具體步驟為：取普魯士藍納米立方體溶液，加入K2CO3和腹水進行反應后，再加入BSA溶液進行反應，離心后取沉淀，即得所述普魯士藍納米立方體-單克隆抗體的偶聯。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述BSA溶液的濃度為0.05～0.15mg/mL。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述K2CO3的物質的量濃度為0.1～0.3M。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S3所述棋盤模擬酶聯免疫分析方法確定包被濃度與抗體用量的具體步驟為：分別包被GCA-OVA包被抗原，溫浴后加入脫脂奶粉，隨后加入普魯士藍納米立方體-單克隆抗體進行反應，確定包被濃度與抗體用量。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述GCA-OVA的濃度為1.25～10μg/mL。
9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述普魯士藍納米立方體和單克隆抗體的稀釋比為1:20～1:1280。
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