[發明專利]一種用于檢測甘膽酸的納米酶聯免疫吸附分析方法

在審

• 申請號: 201911125727.1
• 申請日: 2019-11-18
• 公開（公告）號: CN110927378A
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發明（設計）人: 何綺怡;趙肅清;方巖雄;楊慧怡;崔錫平;陳瑩珊
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/53
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳嘉毅

本發明公開了一種用于檢測甘膽酸的納米酶聯免疫吸附分析方法。該方法包括以下步驟：S1.普魯士藍納米立方體的合成：采用PVP作為穩定劑，一鍋法得到普魯士藍納米立方體；S2.普魯士藍納米立方體?單克隆抗體的偶聯：調整普魯士藍納米立方體，通過靜電作用結合單克隆抗體；S3.棋盤模擬酶聯免疫分析方法確定包被濃度與抗體用量：改變包被GCA?OVA的濃度，改變抗體偶聯的稀釋比例，確定包被濃度與抗體用量；S4.甘膽酸標準曲線的確定：以甘膽酸濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，得到甘膽酸標準曲線。該方法特異性高，靈敏度好，在檢測尿液中的甘膽酸方面具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明屬于免疫檢測技術領域。更具體地，涉及一種用于檢測甘膽酸的納米酶聯免疫吸附分析方法。

背景技術

肝細胞受損并積累引起肝臟疾病，檢測肝細胞受損程度并對肝功能進行實時評價，對于早期診斷、預防和治療肝臟疾病具有重要意義。甘膽酸是膽汁酸的主要成分之一，由膽固醇與肝內的甘氨酸結合而成，其含量的測定對肝病診斷較具敏感性，是評價肝臟功能的一項很重要的指標。相關研究指出，膽汁酸經腎臟排泄很明顯，并與肝膽疾病程度相關；因此，檢測尿液中的甘膽酸對臨床有一定指導價值。但是，臨床上檢測甘膽酸多取靜脈血，而針對一些小兒患者、不便于取靜脈血的患者，檢測其尿液中的甘膽酸有著便利性與對疾病診斷的指導意義。

辣根過氧化物酶，作為目前免疫分析方法中最常用的信號指示酶，被廣泛地應用于ELISA的定量檢測。隨著科技的發展，具有類酶活性的納米材料也逐漸展現了它們優異的性能，例如，可人工合成，不受溫度和酸堿度的影響，穩定性好等。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服在尿液中檢測甘膽酸的技術空白，提供一種普魯士藍納米立方體用于模擬酶聯免疫分析方法，即一種用于檢測甘膽酸的納米酶聯免疫吸附分析方法。

本發明的目的是提供一種普魯士藍納米立方體用于模擬酶聯免疫分析方法。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

本發明提供了一種普魯士藍納米立方體用于模擬酶聯免疫分析方法，包括以下步驟：

S1.普魯士藍納米立方體的合成：采用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作為穩定劑，一鍋法得到普魯士藍納米立方體；

S2.普魯士藍納米立方體-單克隆抗體的偶聯：調整普魯士藍納米立方體，通過靜電作用結合單克隆抗體；

S3.棋盤模擬酶聯免疫分析方法確定包被濃度與抗體用量：改變包被GCA-OVA的濃度，改變抗體偶聯的稀釋比例，確定包被濃度與抗體用量；

S4.甘膽酸標準曲線的確定：以甘膽酸濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，得到甘膽酸標準曲線。

優選地，步驟S1所述普魯士藍納米立方體的合成的具體步驟為：將PVP與普魯士藍溶解在HCl中，均勻攪拌后，放置于烘箱中反應10～30小時，冷卻，離心后取沉淀，即得所述普魯士藍納米立方體。

更優選地，所述HCl的物質的量濃度為0.005～0.015M。

更進一步優選地，所述HCl的物質的量濃度為0.01M。

優選地，步驟S2所述普魯士藍納米立方體-單克隆抗體的偶聯的具體步驟為：取普魯士藍納米立方體溶液，加入K₂CO₃和腹水進行反應后，再加入BSA溶液進行反應，離心后取沉淀，即得所述普魯士藍納米立方體-單克隆抗體的偶聯。

更優選地，所述BSA溶液的濃度為0.05～0.15mg/mL。

更進一步優選地，所述BSA溶液的濃度為0.1mg/mL。

更優選地，所述K₂CO₃的物質的量濃度為0.1～0.3M。