[發明專利]Fc融合蛋白的純化方法有效
| 申請號： | 201911124845.0 | 申請日： | 2019-11-18 |
| 公開（公告）號： | CN110724204B | 公開（公告）日： | 2021-10-22 |
| 發明（設計）人： | 劉云鵬;蘆迪;劉恒嘉 | 申請（專利權）人： | 廣東菲鵬制藥股份有限公司 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/14;C12P21/02 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 周文波 |
| 地址： | 523808 廣東省東莞*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | fc 融合 蛋白 純化 方法 | ||
1.一種Fc融合蛋白的純化方法，其特征在于，其包括：使用初始洗脫液從親和層析柱上洗脫所述Fc融合蛋白，收集洗脫后的初始洗脫液，以得到含Fc融合蛋白的洗脫液，將含有Fc融合蛋白的洗脫液的pH值調節至4.9-5.1；
其中，所述初始洗脫液的pH值為2-3.5；所述親和層析柱選自ProteinA或ProteinG；
在收集洗脫后的初始洗脫液時，所用的收集容器中加入有中和緩沖液以使洗脫后的初始洗脫液與所述中和緩沖液混合后的溶液pH為6-7，即得到含有所述Fc融合蛋白的所述洗脫液；
所述Fc融合蛋白由Fc段結構域和功能蛋白結構域組成，所述Fc段結構域與功能蛋白結構域通過Linker連接；所述功能蛋白結構域選自人的IL-10；
所述Fc段結構域選自人IgG4或鼠IgG1。
2.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述初始洗脫液的pH值為3.4。
3.根據權利要求2所述的純化方法，其特征在于，所述中和緩沖液為Tris溶液，pH為7.5-8.5，濃度為0.8-1.2M。
4.根據權利要求3所述的純化方法，其特征在于，所述初始洗脫液選自醋酸鈉溶液、檸檬酸鈉溶液和甘氨酸溶液中的任意一種。
5.根據權利要求4所述的純化方法，其特征在于，所述初始洗脫液為醋酸鈉溶液。
6.根據權利要求5所述的純化方法，其特征在于，所述醋酸鈉溶液的濃度為18-22mM。
7.根據權利要求3所述的純化方法，其特征在于，所述純化方法還包括：在使用所述初始洗脫液進行洗脫前，先用PBS緩沖液清洗所述親和層析柱；
所述PBS緩沖液為：9-11mM PB，140-160mM NaCl，pH為7.2-7.4。
8.根據權利要求7所述的純化方法，其特征在于，所述純化方法還包括：將含有所述Fc融合蛋白的發酵上清液施加于所述親和層析柱。
9.根據權利要求8所述的純化方法，其特征在于，所述發酵上清液由可表達所述Fc融合蛋白的宿主細胞發酵得到。
10.根據權利要求9所述的純化方法，其特征在于，所述宿主細胞為哺乳動物細胞；所述哺乳動物細胞選自HEK293或CHO。
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