[發(fā)明專利]一種普通小麥基因TaSNX1的克隆方法、應(yīng)用及應(yīng)用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911124815.X
• 申請日: 2019-11-18
• 公開（公告）號(hào): CN110964729A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭文明;劉娜;賈利華;歐行奇;商文艷;林德立;張蕊;邢國珍
• 申請（專利權(quán)）人: 河南農(nóng)業(yè)大學(xué);河南科技學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N15/29
• 分類號(hào): C12N15/29;C12N15/10;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/20
• 代理公司: 北京專贏專利代理有限公司 11797
• 代理人: 于剛

本發(fā)明涉及基因克隆技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種普通小麥基因TaSNX1的克隆方法，提取小麥總RNA，并合成小麥cDNA；以小麥cDNA為模板PCR擴(kuò)增TaSNX1基因全長cDNA；回收并純化擴(kuò)增產(chǎn)物中目的片段并測序鑒定，又公開上述制備方法制備的小麥基因TaSNX1的應(yīng)用；還公開其應(yīng)用方法，先構(gòu)建出重組植物表達(dá)載體，載體上連接有小麥基因TaSNX1的全長克隆和GFP標(biāo)簽，然后將所述重組表達(dá)載體T?P轉(zhuǎn)化入植物體內(nèi)，得到轉(zhuǎn)化植株，利用轉(zhuǎn)化植株研究小麥基因TaSNX1的功能。本發(fā)明，克隆得到的小麥TaSNX1基因的全長cDNA序列和改造后的帶GFP標(biāo)簽的pCambia1301+GFP雙元載體，構(gòu)建TaSNX1過表達(dá)重組載體T?P，然后以農(nóng)桿菌為媒介通過花絮侵染法轉(zhuǎn)化擬南芥，并通過檢測獲得陽性突變體植株即構(gòu)建成TaSNX1擬南芥過表達(dá)株系。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因克隆技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種普通小麥基因TaSNX1的克隆方法、應(yīng)用及應(yīng)用方法。

背景技術(shù)

磷是植物生長和發(fā)育過程中所必需的大量元素之一，在植物的糖分代謝、能量代謝、光合作用、酶促反應(yīng)等過程中起關(guān)鍵作用；同時(shí)也是核酸、植物激素和卵磷脂的重要組成成分，在很大程度上決定了作物的產(chǎn)量與品質(zhì)。研究磷在植物體中的具體作用機(jī)制對提高農(nóng)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)具有重要意義。

小麥?zhǔn)俏覈饕募Z食作物之一，需求量大，施用磷肥對提高小麥的產(chǎn)量具有舉足輕重的作用。土壤中利用效率最低的基本元素就是磷元素，作物的產(chǎn)量也因?yàn)槿绷锥艿胶艽蟮膿p失。世界最大的小麥主產(chǎn)國就是中國，而我國栽培歷史已經(jīng)有幾千年，我國小麥主產(chǎn)區(qū)主要在黃淮流域。而我們主產(chǎn)小麥的土壤大多數(shù)是偏堿性的黏土，因此土壤中的磷元素很大一部分以無效磷的形成存在，使得我國主產(chǎn)區(qū)的農(nóng)作物處在缺磷狀態(tài)。小麥作為我國主要的糧食作物，面臨磷脅迫的問題急需解決。因此，開展小麥磷利用效率相關(guān)的基礎(chǔ)與應(yīng)用研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種普通小麥基因TaSNX1的克隆方法、應(yīng)用及應(yīng)用方法，獲得了小麥基因TaSNX1的克隆，提供了小麥基因TaSNX1的克隆在研究植物磷調(diào)控機(jī)制和遺傳改良中的應(yīng)用，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種普通小麥基因TaSNX1的克隆方法，包括如下步驟：

(1)提取小麥總RNA，并合成小麥cDNA；

(2)以小麥cDNA為模板PCR擴(kuò)增TaSNX1基因全長cDNA；

(3)回收并純化(2)的擴(kuò)增產(chǎn)物中目的片段并測序鑒定，即為普通小麥基因TaSNX1編碼序列。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：步驟(2)中，PCR擴(kuò)增所用引物序列如下：

TaSNX1上游引物：5’-GCTCTAGAATGATCTCCGCGGAGAGG-3’；

TaSNX1下游引物：5’-GGGTCGACATGAACTGGAACACGCCTC-3’。

上述制備方法制備的小麥基因TaSNX1在研究植物磷調(diào)控機(jī)制和遺傳改良上的應(yīng)用。

一種普通小麥基因TaSNX1的應(yīng)用方法，包括如下步驟：先構(gòu)建出重組植物表達(dá)載體，載體上連接有小麥基因TaSNX1的全長克隆和GFP標(biāo)簽，然后將所述重組表達(dá)載體T-P轉(zhuǎn)化入植物體內(nèi)，得到轉(zhuǎn)化植株，利用轉(zhuǎn)化植株研究小麥基因TaSNX1的功能。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：具體步驟如下：