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[發明專利]一種普通小麥基因TaSNX1的克隆方法、應用及應用方法在審

專利信息
申請號: 201911124815.X 申請日: 2019-11-18
公開(公告)號: CN110964729A 公開(公告)日: 2020-04-07
發明(設計)人: 鄭文明;劉娜;賈利華;歐行奇;商文艷;林德立;張蕊;邢國珍 申請(專利權)人: 河南農業大學;河南科技學院
主分類號: C12N15/29 分類號: C12N15/29;C12N15/10;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/20
代理公司: 北京專贏專利代理有限公司 11797 代理人: 于剛
地址: 450002*** 國省代碼: 河南;41
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 普通 小麥 基因 tasnx1 克隆 方法 應用
【權利要求書】:

1.一種普通小麥基因TaSNX1的克隆方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1)提取小麥總RNA,并合成小麥cDNA;

(2)以小麥cDNA為模板PCR擴增TaSNX1基因全長cDNA;

(3)回收并純化(2)的擴增產物中目的片段并測序鑒定,即為普通小麥基因TaSNX1編碼序列。

2.根據權利要求1所述的一種普通小麥基因TaSNX1的克隆方法,其特征在于,步驟(2)中,PCR擴增所用引物序列如下:

TaSNX1上游引物:5’-GCTCTAGAATGATCTCCGCGGAGAGG-3’;

TaSNX1下游引物:5’-GGGTCGACATGAACTGGAACACGCCTC-3’。

3.權利要求1或2中制備的小麥基因TaSNX1在研究植物磷調控機制和遺傳改良上的應用。

4.一種普通小麥基因TaSNX1的應用方法,其特征在于,先構建出重組植物表達載體,載體上連接有小麥基因TaSNX1的全長克隆和GFP標簽,然后將所述重組表達載體T-P轉化入植物體內,得到轉化植株,利用轉化植株研究小麥基因TaSNX1的功能。

5.根據權利要求4所述的一種普通小麥基因TaSNX1的應用方法,其特征在于,具體步驟如下:

S1、T-TaSNX1重組質粒的構建:連接所述小麥基因TaSNX1的克隆與pMD-18T載體,對純化的基因TaSNX1的克隆加A尾,得到帶A尾的目的基因;然后將帶A尾的目的基因與pMD-18T載體連接,得到重組質粒 T-TaSNX1;

S2、改進的重組植物表達載體T-P的構建:利用XbaI和Xhol兩種內切酶分別對重組質粒T-TaSNX1和pCambia1301+GFP雙元載體進行雙酶切,分別得到重組質粒T-TaSNX1雙酶切產物和pCambia1301+GFP載體雙酶切產物;利用T4 DNA連接酶對重組質粒T-TaSNX1雙酶切產物和pCambia1301+GFP載體雙酶切產物進行連接,得到改進的重組植物表達載體T-P;

S3、農桿菌侵染植物體:種植野生型植物體,制備農桿菌感受態細胞,然后用重組表達載體T-P轉化農桿菌感受態細胞,利用陽性農桿菌轉化細胞侵染植物體,得到能有效克隆小麥TaSNX1基因的轉基因植物體。

6.根據權利要求5所述的一種普通小麥基因TaSNX1的應用方法,其特征在于,所述農桿菌為農桿菌GV3101。

7.根據權利要求5所述的一種普通小麥基因TaSNX1的應用方法,其特征在于,所述植物體為擬南芥或者小麥。

8.根據權利要求5所述的一種普通小麥基因TaSNX1的應用方法,其特征在于,S3中挑取陽性農桿菌轉化細胞侵染植物體后,篩選出含有TaSNX1基因的植物體。

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