[發明專利]一種普通小麥基因TaSNX1的克隆方法、應用及應用方法

在審

• 申請號: 201911124815.X
• 申請日: 2019-11-18
• 公開（公告）號: CN110964729A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 鄭文明;劉娜;賈利華;歐行奇;商文艷;林德立;張蕊;邢國珍
• 申請（專利權）人: 河南農業大學;河南科技學院
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/10;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/20
• 代理公司: 北京專贏專利代理有限公司 11797
• 代理人: 于剛

1.一種普通小麥基因TaSNX1的克隆方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）提取小麥總RNA，并合成小麥cDNA；

（2）以小麥cDNA為模板PCR擴增TaSNX1基因全長cDNA；

（3）回收并純化（2）的擴增產物中目的片段并測序鑒定，即為普通小麥基因TaSNX1編碼序列。

2.根據權利要求1所述的一種普通小麥基因TaSNX1的克隆方法，其特征在于，步驟（2）中，PCR擴增所用引物序列如下：

TaSNX1上游引物：5’-GCTCTAGAATGATCTCCGCGGAGAGG-3’；

TaSNX1下游引物：5’-GGGTCGACATGAACTGGAACACGCCTC-3’。

3.權利要求1或2中制備的小麥基因TaSNX1在研究植物磷調控機制和遺傳改良上的應用。

4.一種普通小麥基因TaSNX1的應用方法，其特征在于，先構建出重組植物表達載體，載體上連接有小麥基因TaSNX1的全長克隆和GFP標簽，然后將所述重組表達載體T-P轉化入植物體內，得到轉化植株，利用轉化植株研究小麥基因TaSNX1的功能。

5.根據權利要求4所述的一種普通小麥基因TaSNX1的應用方法，其特征在于，具體步驟如下：

S1、T-TaSNX1重組質粒的構建：連接所述小麥基因TaSNX1的克隆與pMD-18T載體，對純化的基因TaSNX1的克隆加A尾，得到帶A尾的目的基因；然后將帶A尾的目的基因與pMD-18T載體連接，得到重組質粒 T-TaSNX1；

S2、改進的重組植物表達載體T-P的構建：利用XbaI和Xhol兩種內切酶分別對重組質粒T-TaSNX1和pCambia1301+GFP雙元載體進行雙酶切，分別得到重組質粒T-TaSNX1雙酶切產物和pCambia1301+GFP載體雙酶切產物；利用T4 DNA連接酶對重組質粒T-TaSNX1雙酶切產物和pCambia1301+GFP載體雙酶切產物進行連接，得到改進的重組植物表達載體T-P；

S3、農桿菌侵染植物體：種植野生型植物體，制備農桿菌感受態細胞，然后用重組表達載體T-P轉化農桿菌感受態細胞，利用陽性農桿菌轉化細胞侵染植物體，得到能有效克隆小麥TaSNX1基因的轉基因植物體。

6.根據權利要求5所述的一種普通小麥基因TaSNX1的應用方法，其特征在于，所述農桿菌為農桿菌GV3101。

7.根據權利要求5所述的一種普通小麥基因TaSNX1的應用方法，其特征在于，所述植物體為擬南芥或者小麥。

8.根據權利要求5所述的一種普通小麥基因TaSNX1的應用方法，其特征在于，S3中挑取陽性農桿菌轉化細胞侵染植物體后，篩選出含有TaSNX1基因的植物體。