[發(fā)明專利]一種拉薩小檗胚性愈傷組織誘導(dǎo)及快速增殖的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201911124590.8 | 申請日： | 2019-11-15 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN110731270B | 公開（公告）日： | 2022-03-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 林良科;溫鏗 | 申請（專利權(quán)）人： | 四川億源農(nóng)業(yè)有限公司 |
| 主分類號(hào)： | A01H4/00 | 分類號(hào)： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 四川國信鼎創(chuàng)專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 51331 | 代理人： | 李永芬 |
| 地址： | 623500 四川省阿*** | 國省代碼： | 四川;51 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 拉薩 小檗胚性愈傷 組織 誘導(dǎo) 快速 增殖 方法 | ||
1.一種拉薩小檗胚性愈傷組織誘導(dǎo)及快速增殖的方法，其特征在于：包括以下步驟：
A、挑選采集于10～11月間的顆粒飽滿、無損傷的拉薩小檗種子作為外植體；
B、對所述外植體進(jìn)行預(yù)處理以及消毒處理；
C、將所述外植體在無菌環(huán)境下取出完整種子胚；
D、將所述種子胚接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，進(jìn)行14～18d第一次暗培養(yǎng)獲得愈傷組織，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為B5培養(yǎng)基、KT 0.2～0.4mg/L、NAA1.0～2.0mg/L、瓊脂5.8g/L、蔗糖30g/L，pH條件為5.8；
E、對誘導(dǎo)獲得的所述愈傷組織中取細(xì)胞團(tuán)接種到增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)第二次暗培養(yǎng)直至形成胚性愈傷，所述增殖培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基、BA0.2～0.4mg/L、NAA 1.0mg/L，瓊脂5.2g/L，蔗糖20g/L，pH條件為5.8。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種拉薩小檗胚性愈傷組織誘導(dǎo)及快速增殖的方法，其特征在于：所述增殖培養(yǎng)基中每14～21d進(jìn)行一次繼代培養(yǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種拉薩小檗胚性愈傷組織誘導(dǎo)及快速增殖的方法，其特征在于：所述預(yù)處理包括用0.1～0.15mg/ml赤霉素浸泡24h以打破所述拉薩小檗種子的休眠狀態(tài)，用清水沖洗20～30min，用濾紙吸除所述拉薩小檗種子表面水分。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種拉薩小檗胚性愈傷組織誘導(dǎo)及快速增殖的方法，其特征在于：所述消毒包括用70％～75％酒精消毒30s后，用無菌水沖洗2次，再用0.1％升汞消毒10～15min，用無菌水沖洗5次后，使用無菌濾紙吸除拉薩小檗種子表面水分。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種拉薩小檗胚性愈傷組織誘導(dǎo)及快速增殖的方法，其特征在于：所述暗培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：保持每天24h遮光，溫度22～26℃、相對濕度為75％～95％、氣壓為60～80kPa、CO2濃度為1000～1500ppm。
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